副溶血性弧菌流行群特异多重PCR鉴定论文.docVIP

　　副溶血性弧菌流行群特异多重PCR鉴定论文 【摘要】 目的 建立适于基层单位应用的针对副溶血性弧菌流行群的特异多重PCR方法。 方法 查找副溶血性弧菌的基因序列，将当前流行群的序列和以往副溶血性弧菌的序列进行比较，设计针对流行群的PCR引物，并进行多重PCR扩增。结果 运用群特异多重PCR法可特异性的扩增出当前流行群副溶血性弧菌的目的基因片段，可大大缩短鉴定时间。 结论 群特异多重PCR法能快速鉴定当前副溶血性弧菌流行群，有利于流行病学溯源等。 【关键词】 副溶血性弧菌 副溶血性弧菌( Vibrio parahaemolyticus ,Vp)是一种嗜盐性细菌。人由于生吃或食用未煮熟的海产品常引起食源性感染，导致急性胃肠炎〔1〕。副溶血性弧菌可分为13个O血清型和71个K血清型〔2〕，当前流行的副溶血性弧菌以O3:K6、O4:K68和部分O1血清型为主。研究显示.freelin，10000r/min离心5min，取上清作为DNA模板。 14 多重PCR扩增目的基因和扩增条件优化 分别采用单一引物对扩增相应目的基因片段，进行PCR扩增条件的摸索，接着进行多重PCR扩增条件的筛选和优化。最后采用的多重PCR扩增条件是50μl的PCR反应体系中含10 PCR反应缓冲液50μl，25mmol MgCl2 30μl，10mmol dNTP 10μl，tdh上游引物（25pm