细胞工程-BDG.ppt

生产蛋白质药物 白介素、干扰素、胰岛素 生产限制性内切酶 生防菌 哈茨木霉菌T-22株系 生物肥料 固氮菌 植物激素 赤霉素 环境治理 二噁英、海洋浮油 含糖废液的利用 酵母 木质纤维的利用 白腐真菌 采矿 氧化亚铁硫杆菌 四、细胞工程在食品工业上的应用 动物细胞工程 植物细胞工程 微生物细胞工程 四、细胞工程在食品工业上的应用 动物细胞工程 培育食用肉、动物育种、单克隆抗体 植物细胞工程 食品添加剂：甜味剂、鲜味剂、防腐剂、色素 香料：香草素、可可香素、菠萝风味剂 抗氧化剂：α-生育酚 天然食品：食用琼脂 植物药：人参皂苷、迷迭香酸、小檗碱 微生物细胞工程 酵母菌的育种 酿酒酵母+克鲁维酵母，生产啤酒 氨基酸生产菌育种 谷氨酸生产菌 酶制剂生产菌 芽孢杆菌 谷氨酸棒杆菌 酵母 芽孢杆菌 * 愈伤组织：离体的植物器官、组织或细胞，在培养一段时间以后，通过细胞分裂，形成一种排列疏松无规则、高度液泡化、无定形态的薄壁细胞组成的组织。 植物细胞融合技术 原生质分离 原生质纯化 原生质活力测定 植物体细胞杂交过程 去壁 原生质的纯化 植物材料经处理后，混合液中除了完整、未损伤的原生质，还包含未去壁的细胞、破碎的原生质、细胞器等，需要去除杂质获得完整原生质 过滤 离心 漂浮 原生质的活力测定 形态识别 形态、渗透压 荧光显微镜法（FDA法）活细胞发出黄绿色荧光 FDA：荧光素二乙酸酯 酚藏花红染色法 死细胞染色 伊凡蓝染色法 死细胞染色 相差显微镜观察 细胞质流动、细胞核 植物体细胞杂交应用研究 植物细胞器移植 植物细胞器移植是指：从不同植物细胞中分离得到细胞器，再将其导入受体原生质中的过程。 原生质摄取细胞器的机制： 内吞 融合 脂质体包装后融合 细胞器分离 机械法 匀浆 过滤 离心 从原生质体中分离 细胞器摄入 夹层离心法 PEG诱导法 脂质体包装 细胞器移植概况 细胞核移植 叶绿体移植 线粒体移植 细胞重建 在融合因子介导下，使细胞质体与完整细胞合并，构成核质杂种 植物染色体工程 染色体加倍技术 单倍体育种 染色体非整倍改造 染色体加倍 同源多倍体较二倍体形态更大，代谢活动增强 秋水仙素 破坏纺锤丝形成 单倍体育种 单倍体只有一套染色体，每个基因都能显示相应的形状，易发现新产生的突变，可用于研究基因功能及基因剂量效应 获得纯合二倍体 花药培养 花粉培养 异源种属花粉诱导 花药培养 花粉、药隔、药壁、花丝 花粉培养 将花粉从花药中分离出来，以单个花粉粒作为外植体进行离体培养 选择合适的培养基、严格控制培养条件 异源种属花粉诱导 亲缘关系较远的花粉不易使母本卵细胞受精，又能刺激卵细胞单性发育，由此产生单倍体 玉米、野生稻给普通水稻授粉 白菜型油菜给甘蓝型油菜授粉 其它植物细胞工程技术 胚胎培养 快速繁殖 脱毒技术 细胞悬浮培养 胚胎培养 植物胚胎培养是指在离体条件下使胚或具胚器官发育成幼苗的培养技术 胚培养 缩短育种周期 胚乳培养 培养三倍体植株 胚珠子房培养 克服远缘杂交败育 快速无性繁殖 利用离体培养技术，将优良植株的器官、组织、细胞进行立体培养，，短期内获得大量遗传性状一致的个体 无性快繁步骤： 无菌母株获得 不定芽增殖 完整植株形成 再生植株训化 再生植株鉴定 试管苗大规模培养 培育脱毒作物 微茎尖培养 珠心组织培养 热处理 悬浮培养 将细胞或小块愈伤组织在无菌培养液中进行体外生长、发育 能产生大量均一细胞，增殖速度快 植物组织培养大量生产紫草素 现在已有胡萝卜、芹菜、柑橘、咖啡、棉花、玉米、水稻、橡胶等几十种植物的人工种子试种成功，但由于成本较高，中国尚未应用于生产。 紫草 紫草素 愈伤组织 紫杉醇 三、微生物细胞工程及应用 应用微生物细胞进行细胞水平的研究和生产 包括微生物细胞的培养、遗传性状的改变、微生物细胞的直接利用、微生物代谢产物的获取 影响微生物细胞融合的因素 一、菌株的遗传性状 需要有选择标记，标记主要通过诱变获得 需先测定各个标记的自发回复突变率，若回复突变率过高，则不宜作为选择标记 二、制备原生质体的菌龄 对数期细胞的细胞壁中肽聚糖的含量最低，对溶菌酶也最敏感。 三、细胞的前处理 细胞壁结构的差异 细菌 G+ 溶菌酶去壁 G- EDTA+溶菌酶、 EDTA+溶菌酶+Gly 真菌 蜗牛酶，是多酶体系，涵纤维素酶、甘露聚糖酶、葡聚糖酶、几丁质酶、α-淀粉酶、酯酶 融合细胞筛选 互补法鉴定 营养缺陷、抗性 细胞学鉴定 荧光标记