生化反应与血清学鉴定—培训课件.ppt

生化反应与血清学实验 《医学微生物学》实验七 一、生化反应 掌握细菌生化反应的原理和临床意义。 熟悉鉴别细菌常用的生化试验原理、方法和结果判断。 [实验目的] 生化反应基本原理 不同的细菌 含有不同的分解代谢的酶 具有不同的分解代谢途径 对同一营养物质的分解代谢及其产物有所不同 利用生化方法检测代谢产物以判断细菌的分解代谢特征，从而达到鉴定细菌的目的。 称：细菌的生化反应检测法 知识点 常见的生化反应 对 糖 的 发 酵 甲基红试验 单糖发酵试验 VP试验 对 蛋白质的分解 吲哚试验 硫化氢试验 枸橼酸盐利用试验 尿素酶试验 其他试验 实验材料 1.菌种 大肠埃希菌、沙门氏菌 2.微量生化反应管 葡萄糖、乳糖、蔗糖、麦芽糖、甘露醇、蛋白胨水（靛基质）、硫化氢。 3.试剂 吲哚试剂 葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇、蔗糖 大肠埃希菌：分解乳糖产酸产气 致病性肠道细菌：大多数不分解乳糖 1.糖发酵试验 HCOOH 脱氢酶 CO2+H2 1.糖发酵试验 （1）原理 细菌产生的酶 酸 糖 （酸碱指示剂） 气体 溴甲酚紫 1.糖发酵试验 （2）方法 37℃培养18～24h 5种糖生化反应管 大肠埃希菌、沙门氏菌 接种针穿刺接种 观察结果 中性或碱性 → 紫色 酸性 → 黄色 1.糖发酵试验 （3）结果判断 溴甲酚紫 ＋ － ＋ 有细菌生长培养基呈混浊，可能出现3种结果。 （3）结果判断 2.靛基质（吲哚）试验 色氨酸酶 吲哚 （无色） 色氨酸 吲哚试剂 玫瑰吲哚 （红色） （1）原理 （2）结果判断 阳性 2.靛基质（吲哚）试验 3.硫化氢试验 酶 硫化氢 含硫氨基酸 硫化铁 黑褐色 或硫化铅 （1）原理 （2）结果判断 3.硫化氢试验 生化反应材料分配 分组 两人 /组 菌种 沙门氏菌、大肠杆菌各一支 生化反应管 七支 /人 二、血清学鉴定 掌握细菌的血清学鉴定法 。 [实验目的] 实验原理 根据抗原抗体反应具有高度特异性的特点，用已知抗体来检测未知抗原（细菌）。 二、血清学鉴定 实验材料 1.菌种 待检细菌 2.试剂 多价沙门菌O(A-F)诊断血清 3.其他 载玻片 沙门氏菌的主要抗原组成 O抗原：至少58种, 含相同抗原组分归为一组，引起人类疾病的沙门菌大多数在A~F组。 H抗原：分为Ⅰ、Ⅱ相，Ⅰ相以a、b、c等表示，Ⅱ相以1、2、3等表示。 Vi抗原：抗原性弱，不稳定，可阻止O抗原与其相应抗体的凝集反应。 沙门氏菌诊断血清（11种） O2 O4 O7 O9 Ha Hb Hc Hd Hi Vi A-F群多价O A-F群多价O 先用A－F和 Vi血清检测，根据结果再进行其他鉴定。 注意： 实验方法 50ul血清+待检菌 50ulNS+待检菌 结果判断 均匀混浊 颗粒状凝集物 ＋ － 群别 菌 型 抗 原 o H A 甲型副伤寒沙门菌 1,2,12 a:- B 乙型副伤寒沙门菌 德比沙门菌 鼠伤寒沙门菌 1,4,5,12 1,4,12 1,4,5,12 b:1,2 f,g:- i:1,2 C 猪霍乱（或丙型副伤寒）沙门菌 6,7,(Vi) c:1,5 D 伤寒沙门氏菌 9,12,Vi d:- E 鸭沙门氏菌 3,10 e,h:1,6 F 阿伯丁沙门氏菌 11 i:1,2 沙门氏菌属国内常见菌型诊断抗原表 注意事项 1.生理盐水端应不出现凝集颗粒。 2.沙门菌Vi抗原存在时可阻止O抗原与相应抗体发生凝集，故在做玻片凝集时应加注意，需事先加热破坏Vi抗原，O抗原才得以与相应的O诊断血清发生凝集。 血清学实验进程 先鉴定A－F和Vi，根据结果再进行其他鉴定。 A－F Vi 实验进程 - - 为非沙门氏菌属，不再继续鉴定其他抗原成分。 + - 初步判断为沙门氏菌属，继续鉴定其他抗原成分。 - + 初步判断为沙门氏菌属，但需去除菌体Vi荚膜后再继续鉴定其他抗原成分。 血清学实验材料分配 分组 4人 /组 菌种 待测菌种一支 诊断血清 1盒 /组 群别 菌 型 抗 原 o H A 甲型副伤寒沙门菌 1,2,12 a:- B 乙型副伤寒沙门菌 德比沙门菌 鼠伤寒沙门菌 1,4,5,12 1,4,12 1,4,5,12 b:1,2 f,g:- i:1,2 C 猪霍乱（或丙型副伤寒）沙门菌 6,7,(Vi) c:1,5 D 伤寒沙门氏菌 9,12,Vi d:- E 鸭沙门氏菌 3,