醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白2.pptVIP

醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白 【实验目的】 1、了解电泳的一般原理、掌握醋酸纤维素薄膜电泳操作技术； 2、掌握醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白的方法。 【实验原理】 由于各种血清蛋白质的等电点不同，因此在pH 8.6的缓冲液中，各种血清蛋白质所带电荷量不同，同时由于它们的相对分子质量也不同，造成电泳迁移率不同，所以在醋酸纤维薄膜上电泳后，可将各种血清蛋白质分离开。 【实验材料】 1．电泳仪 包括直流电源整流器和电泳槽两个部分。 2．醋酸纤维素薄膜。 【实验方法】 1．准备与点样 (1)将薄膜切成2.5 cm×8 cm的小片。在薄膜无光泽面(正面)的一端约2 cm处用硬铅笔划一点样线。 (2)将薄膜无光泽面向下，置巴比妥缓冲中， 使膜条自然浸湿 。 (3)将充分浸透的膜条取出，用滤纸吸去多余的缓冲液，把膜条置洁净滤纸上。 (4)用载玻片点样。 2．电泳 将点样后的膜条置于电泳槽架上，放置时，无光泽面(即点样面)向下，点样端置于阴极，槽架上以四层滤纸作桥垫，膜条与滤纸需贴紧，待平衡5 min后通电，电压为110 V，电流为0.4～0.6 mA/cm，通电1 h左右关闭电源。 3．染色 通电完毕后用镊子将薄膜取出，直接浸于氨基黑10B的染色液中，染5 min取出，立即浸入盛有漂洗液的培