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BD流式细胞分选仪原理和应用
流式细胞分选仪原理和应用
分选流式基本原理
分选流式两种激发方式
细胞激发方式
石英杯激发:光路固定。
空气激发:光路不固定。
分选流式应用
• 免疫学
高速平台分选流式基本要求:
• 血液学
分选速度快;
• 肿瘤学
分选活性、纯度、得率高;
• 干细胞
• 神经生物学 光路固定,无需调光路;
• 信号传导 采用全自动化dropdelay计算方法。
• 生殖发育
• 染色体/精子分选
• 植物学
、、、、
分选流式定律:分选速度、得率和纯度相互制约
分选速度
分选纯度
分选得率
Aria在这三个方面达到最佳的一个平衡
1. 分选速度
分选速度:振荡频率、鞘液压力和喷嘴大小有关。
分选速度和样本浓度、振荡频率、鞘液压力成正比,与喷嘴大小成反
比。现在国内用户用的喷嘴大小只有70um-100um,在这两种喷嘴使
用条件下,70um喷嘴对应:鞘液压力都是在60-70psi,振荡频率90-
100KHz;100um喷嘴对应:鞘液压力在25psi左右,振荡频率在
40KHz左右,所以说在实际使用中,对用户真正有意义的喷嘴大小
70um-100um的喷嘴,振荡频率低于100KHz,鞘液压力低于70psi。
在所有实际分选中,分选速度一般不超出20000细胞/秒。
2. 分选得率、纯度和活性高
分选得率:目的细胞的百分比、分选速度、分选纯度成反比
。
分选纯度
• 1. 液滴延迟
• 2. 液滴分析精度
• 3. 分选速度
• 4. 液流稳定性(石英杯激发保证液流不受气流和温度变
化而变化,是最稳定的)
分选调试的方便性、灵活性
细胞被检测至包含该细胞的液滴被充
电偏转的时间需要精确计算,才能保
证稀有细胞的纯度和得率,这就是
drop delay。
•AccuDrop功能(BD专利),
软件自动快速精确计算液滴
延时,保证分选的纯度和得
率
最大限度的纯化细胞:最高的分选纯度(液滴32等分)
Yield模式
分选活性(多种因素决定)--Aria具备最好活性
• 1. 样本准备
• 2. 鞘液压力和喷嘴大小
• 3. 管路的无菌性
• 4. 分选样本和收集样本温度控制
• 5. 分选收集时的自动减速系统
• 6. 液流的稳定性
• ….
1.免疫学:需要多激光多色分析分选,低含
量分选。
流式最初应用领域,目前和免疫相关研
究都会用到分选流式,但是其对分选流
式提出了多激光多色和分析分选速度快
的要求。
低含量信号检测:快速分析/分选
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