实验八、细菌的芽孢染色法.ppt

实验四、培养基的制备 实验五、细菌的芽孢染色法 实验的目的要求 学习并掌握芽孢染色法 初步了解芽孢杆菌的形态特征 细菌芽孢染色的意义 细菌能否形成芽孢以及芽孢的形状、芽孢在芽孢囊内的位置、芽孢囊是否膨大等特征是鉴定细菌的依据之一。 芽孢又称内生孢子，是某些细菌生长到一定阶段在菌体内形成的休眠体，通常呈圆形或椭圆形。 细菌芽孢的基本构造 孢外壁 芽孢衣 皮层 芽孢壁 芽孢质膜 芽孢质 芽孢核区 细菌芽孢化学成分 孢外壁：脂蛋白 芽孢衣：疏水性角蛋白 皮层：肽聚糖、DPA-Ca 芽孢壁：肽聚糖 芽孢质膜：磷脂、蛋白质 芽孢质： DPA-Ca、核糖体、RNA、酶 芽孢核区：DNA 细菌芽孢染色原理 细菌的芽孢具有厚而致密的壁不易着色，若用一般染色法只能使菌体着色而芽孢不着色(芽孢呈无色透明状)。 芽孢染色法就是根据芽孢既难以染色而一旦染上后又难以脱色这一特点而设计的。 所有的芽孢染色法都基于同一个原则：除了用着色力强的染料外，还需要加热，以促进芽孢着色，再使菌体脱色，而芽孢上的染料则难以渗出，故仍保留原有的颜色，然后用对比度强的染料对菌体复染，使菌体和芽孢呈现出不同的颜色，因而能更明显地衬托出芽孢，便于观察。 材料 菌种: 苏云金芽孢杆菌 枯草芽孢杆菌 染色剂： 5%孔雀绿水溶液 0.5%番红水溶液。 仪器或其他用具： Eppendorf管 Eppendorf管架 载波片 木夹 显微镜 电磁炉 搪瓷烧杯 微量加样器 方法 Schaeffer-Fulton氏染色法 改良的Schaeffer-Fulton氏染色法 Schaeffer-Fulton氏染色法 制片 染色 复染 镜检 改良的Schaeffer-Fulton氏染色法 制备菌悬液 染色 涂片固定 脱色 复染 镜检 要 求 每个同学至少需要用改良法成功对苏云金芽孢杆菌进行芽孢染色。 结果需要经老师确认成功。 按照使用要求对显微镜进行清洁、登记，并经老师确认。 保持实验室清洁。 第五组卫生值日。 制 片 染 色 复 染 镜 检 制备菌悬液 染色 涂片固定 脱色 生命科学学院微生物学教研室－YJH 微生物学实验 生命科学学院微生物学教研室-YJH 生理盐水 1、滴生理盐水 挑取少量菌苔 与生理盐水混匀 均匀涂布 或电吹风吹干 2、涂片 滴半滴生理 盐水在载玻 片中央 3、干燥 室温自然晾干 5%孔雀绿染液 1、滴孔雀绿染液 滴加数滴孔 雀绿染液在 菌膜上 2、加热染色 用木夹夹住载 玻片一端，在 微火上加热 至冒蒸汽开始计 时，维持5min 3、水洗 不要直接冲菌膜 可从玻片反面冲洗 0.5%番红水溶液 1、滴番红水溶液 滴加数滴 番红染液 在菌膜上 2、水洗 不要直接冲菌膜 可从玻片反面冲洗 或吸水纸吸干 1、干燥 或电吹风吹干 室温自然晾干 2、镜检 显微镜操作 油镜使用 生理盐水 1、滴生理盐水 挑取2-3环菌苔 与生理盐水混匀 均匀涂布 2、涂片 在EP管中滴2 滴生理盐水 5%孔雀绿染液 1、滴加孔雀绿染液 沸水浴加热 15-20min 2、加热染色 在EP管中滴2-3 滴孔雀绿染液 经孔雀绿染 色细菌悬液 1、滴菌悬液 用接种环 均匀涂布 或电吹风吹干 2、涂片 滴半滴菌悬液 在载玻片中央 3、干燥 室温自然晾干 生命科学学院微生物学教研室－YJH 微生物学实验