生物光合作用中ATP合酶的催化作用机制.docVIP

生物光合作用中ATP合酶的催化作用机制 光合作用（photosynthesis)是地球上进行的最大的有机合成反应。它是指含光合色素（主要是叶绿素）的植物细胞和细菌，在日光下利用无机物质(CO2, H2O, H2S)合成有机化合物（C6H12O6），并释放出氧气(O2)或其他物质（如S等）的过程[1]。其一般化的表示形式为： （括号后加6） 光合作用的场所是叶绿体，其过程分为两个阶段：第一阶段是光反应，第二阶段是暗反应。光反应在叶绿体的类囊体膜上进行，利用日光使H2O裂解，并生成高能磷酸化合物（ATP）和还原力（NADPH）。暗反应在基质中进行，利用光反应形成的ATP将CO2还原为糖。(缺少图1 说明) 高等植物和藻类具有两个光系统：PS-Ⅰ和PS-Ⅱ。PS-Ⅰ以NADPH的形式提供还原力；PS-Ⅱ光解水生成氧气，并把释放的电子送入连接PS-1和PS-2的电子传递链。在电子传递过程中引起质子跨膜泵送和ATP合成。 图1.叶绿体类囊体膜中质子和电子流的线路（光合磷酸化机制）。 暗反应主要是CO2和H2O到糖的合成。以C3为例说明（图2），反应中CO2的受体是核酮糖-1，5-二磷酸，简称RuBP，此五碳糖与CO2结合，在核酮糖-1，5-二磷酸羧化/氧化酶的作用下，被裂解成2分子3-磷酸甘油酸（PGA）。PGA被ATP磷酸化、被NADPH还原，脱去1分子磷酸，产生3-磷二酸甘油醛（G3P）。在磷酸甘油酸激酶和ATP的作用下，生成1，3-二磷酸甘油酸，1，3-磷二酸甘油酸在NADP+-甘油醛-3-磷酸脱氢酶的作用下生成3-磷二酸甘油醛，经过一系列反应，G3P被重排成新的RuBP或者合成葡萄糖和其它糖类。暗反应过程有三步需要ATP提供能量，这些ATP由光反应阶段ATP合酶催化作用下合成提供。 ATP合酶广泛存在于叶绿体、线粒体和细菌中。ATP合酶既能依靠质子动力势合成ATP，也能水解ATP 形成机体需要的质子梯度，研究ATP合酶的催化作用机理，尝试定向控制作用过程，对提高光合作用效率，进而提高农作物产量等具有很大指导意义。 图2：暗反应-C3循环示意图 有关ATP合成的驱动力，1961年Mitchell提出化学渗透假说[2]，主要内容是线粒体内膜上呼吸链组分间氢与电子的交替传递，使质子（H+）从内膜内侧向外侧定向转移，由于膜对H+的不通透性，从而形成跨膜的质子梯度，或称为质子动力势，质子梯度作用于ATP合酶催化形成ATP。这个假说得到大量实验的验证和支持，从而获得1978年的诺贝尔化学奖。 从分子层面上对ATP合酶催化机理进行探索，首先需要搞清楚ATP合酶的结构。ATP合酶主要由F1（深在膜外的水溶性部分）和F0（嵌入膜内）组成（图3）。F1 由?????????五种多肽链构成， 即????????，?和?亚基以交替方式排列，构成ATP合酶的催化部位。 ???????亚基位于中央F0和F1的界面上，形成两个狭长的柄。由?亚基和F0的b亚基形成的柄将（?????和?亚基相对地固定在一起，在酶的转换时一起旋转。F0由a, b, c三种亚基构成。最大的a亚基高度疏水，位于膜内。b亚基有一个疏水的N-端，定位于膜上，而其亲水部分插入F1中，c亚基有两个疏水部分，可以跨越整个膜，所有亚基形成一个环状结构，每个亚基含有一个离子键和位点，可以键合一个质子。 图3 ATP合酶的结构模型 关于ATP合酶的催化作用机理，1964，Boyer 首先提出三点顺序结合变化机制[3]: 除此之外，为了满足“结合变化机理”所提出的三个?亚基不断交替呈现不同构象的要求，Boyer 又提出旋转催化的设想，他认为跨膜质子梯度驱动ATP合酶的F0的c亚基转动，继而带动F1的?亚基而使3个b亚基构象发生交替变化来合成ATP。Boyer的假说虽然在当时就已经受到了很多间接实验证据的支持，但它的真正得到承认，是在1994年Walker小组发表了F1的晶体结构之后[4]。 图4 F1-ATP 酶水解过程的晶体结构分析 1994，Walker通过对F1-ATP 酶的晶体结构分析（图4），清晰显示F1-ATP酶在ATP水解过程中3个b亚基的构象明显不同：一个是结合ATP即将键裂的tight状态，一个是ADP即将释放的Loose状态，一个是无底物结合放入Open状态。他们的结果有力支持了Boyer的假说，因此共享了1997年诺贝尔化学奖。但是对Boyer的旋转催化机理最有力的支持还是日本的Yoshid小组[5]，他们设计实验直接观察到了?亚基的顺时针转动（图5）。 图5，?亚基的转动实验 不仅?亚基的转动被证实，人们还发现?亚基的旋转呈阶梯状，120°一个周期性[6,7,8,9]。因ATP合成以及水解是完全可逆的过程，所以以ATP的水解为例说明，三种颜色表示三个不同的催化活性位。以