LCMS及GCMS原理.pptVIP

LC-MS ◆ 一.送样注意事项 1. 均匀取样: 将样品混合好再取样。 2. 送样量： 固体约为1mg 、液体约为10ul。 3. 要求样品必须澄清透明，以免损坏色谱柱； 若样品混浊,请用滤头过滤后再测样. 4. 请使用甲醇、乙腈、水、THF、DMSO、 DMF等极性溶剂溶解样品，尽量避免使用正 己烷等非极性、弱极性溶剂溶样. ◆ 二.仪器的配置 LC/MS (Agilent 1100 LC , VL MS; Shimadzu 2010 A ) ESLD (SEDEX 75; PL1000 ) →ESLD HPLC → DAD→ →MSD 样品先经过色谱柱的分离后进行DAD测试，再分流两路进入ELSD和MS检测器测试。 ◆. 检测器的说明 二极管阵列检测器(Diode-Array Detector,DAD) 分析整个波长范围(190nm- 800nm)有吸收的组分,提供三维信息(T-?-A) ,确定最大吸收波长. 其中在我们的报告提取波长为214nm的色谱图. 蒸发光散射检测器(Evaporation light-scatter Detector ,ELSD)是一种质量型检测器，对所有固体物质均有几乎相等的响应，与待测物的光学性质或电化学性质无关,故对于没有光学吸收特征的物质可获得检测. 液质联用 (liquid Chromatagraphy-Mass Spectrometry) 可提供 色谱,光谱,质谱等多种信息, 其中在我们的报告中打印有 总离子色谱图(Total ion current chromatogram,TIC), 提取离子色谱图 (extract ion chromatogram,EIC) , 质谱棒状图(Mass spectrum) ? 总离子色谱图TIC ---分析时间内所有扫描获得的离子 流强度对时间作图所得的色谱图. 提取离子色谱图EIC—根据监测化合物分子量提取其产生的离子 流强度对时间作图所得的色谱图. 质谱棒状图---不同质量的离子质荷比与其相对的离子强度所形成的谱图 三. 色谱条件: ◆酸性条件: 0.05%-0.01% TFA in ACN and H2O; gradient 10% to 90%; 酸法 ????????? ????????????????? ? ? 1-L-P?? ???????? 常规酸法正离子 ????????????? 1-L-P-S ??????? 短柱酸法正离子 ???????????? ? ????? 1-L-P- CN ????? ? CN基柱酸法正离子 ???? ????? ?????? ◆碱性条件: ACN/10mM NH4HCO3 in H2O; gradient 10% to 90%; 碱法 ??????????????????????????? ? 2-L-P ???????? ?碱法正离子 ?????????????????? ? ?????? 2-L-N ??????? ?碱法负子 ??????? 4.图谱分析 分析报告的格式与解释 图1：ADC ELSD： 蒸发光散射检测器检测的色谱图。 图2：DAD 214nm 紫外波长为214nm的色谱图. 对于较纯的样品，色谱峰在1000mAu范围内表明样品浓度较适宜, 若色谱峰过高，表明样品浓度较高，所检测出的杂质百分含量校高。 图3：MSD TIC 总离子色谱图 图4：EIC提取离子色谱图;正离子模式（pos,positive +H，+Na ） 或负离子模式（neg ，negative -H）。 图5：质谱棒状图。 积分结果表：分别表示ELSD、DAD 214nm色谱峰的面积百分