生物工业下游第七章反胶团萃取法摘要.pptVIP

* * 研究了用三辛基甲基氯化铵( TOMAC) / 正辛醇/ 异辛烷反胶团相转移法萃取细胞色素C时,水相pH 值、离子强度、正辛醇含量、相体积比、搅拌时间等因素的影响. 结果表明,正辛醇的量、水相pH 值是萃取过程的关键因素,在低离子强度( CKCl= 0.05 mol/ L) 、高pH 值(pH=13.66) 、含正辛醇体积分数为0.85%的情况下,萃取率接近100%. * * 三辛基甲基氯化铵( TOMAC , Fisher Scientific ,Hong Kong) ; 细胞色素C(CytC) ,药用试剂,分子量为12 000～13 000 , pI为10.7 ; 正辛醇、异辛烷、KCl 、NaOH 等试剂均为分析纯;去离子水; 将一定量的TOMAC 和正辛醇溶于异辛烷中配制成CTOMAC =10 mmol/L的TOMAC/正辛醇/异辛烷溶液; 取若干支CytC(15mg/支) 溶于水配制成一定浓度(C0)的CytC溶液. 主要试剂及溶液配制 * * 将以上配好的Cyt - C 溶液的pH 和离子强度调节到所需值,按一定体积比与TOMAC/ 正辛醇/异辛烷反胶团溶液于带塞小锥形瓶中混合,在磁力搅拌器上,混合一定时间达平衡后,在3 500 r/ min的转速下离心分相3 min ,在分液漏斗中静置分层数分钟,回收上层有机层。 在721 型分光光度计上于520 nm 处,测萃取平衡后水相的吸光度,由标准工作曲线求得蛋白质CytC的浓度(C ),计算萃取率( Sf)。 C0 - C 萃取率Sf = ×100 % C0 　细胞色素C( CytC) 的提取 人有了知识，就会具备各种分析能力， 明辨是非的能力。 所以我们要勤恳读书，广泛阅读， 古人说“书中自有黄金屋。 ”通过阅读科技书籍，我们能丰富知识， 培养逻辑思维能力； 通过阅读文学作品，我们能提高文学鉴赏水平， 培养文学情趣； 通过阅读报刊，我们能增长见识，扩大自己的知识面。 有许多书籍还能培养我们的道德情操， 给我们巨大的精神力量， 鼓舞我们前进。 * * * 第二节 生理活性物质的分离浓缩 * * b a c C 是有机相—水相间的分配萃取，是从主体水相向溶解于有机溶剂相中纳米级、均一且稳定的、分散的反胶团微水相中的分配。 * * b c 特点：萃取进入有机相的生物大分子被表面活性分子所屏蔽，避免了与有机溶剂相直接接触而引起的变性、失活；同时反胶团微水相体积最多仅占有机相的几个百分点，是一个浓缩的过程。 * * 反胶团的溶解作用 由于反胶团内存在微水池，故可溶解氨基酸、肽和蛋白质等生物分子，为生物分子提供易于生存的亲水微环境。因此，反胶团萃取可用于氨基酸、肽和蛋白质等生物分子的分离纯化，特别是蛋白质类生物大分子。 * * 四种反胶团溶解蛋白质模型 (a)为水壳模型，蛋白质位于水池的中心，周围存在的水层将其与反胶团壁(表面活性剂)隔开； (b)蛋白质分子表面存在强烈疏水区域，该疏水区域直接与有机相接触； (c)蛋白质吸附于反胶团内壁； (d)蛋白质的疏水区与几个反胶团的表面活性剂疏水尾发生相互作用，被几个小反胶团所“溶解”。 * * 表面性质不同的蛋白质可能以不同的形式溶解于反胶团相，但对于亲水性蛋白质，目前普遍接受的是水壳模型。 b c d a 反胶团的溶解作用 * * 反胶团有哪些有用的特征可用于生物物质的分离？ 将反胶团萃取技术与其他蛋白质分离技术相比较，指出它们各自的适用场合？ 影响反胶束萃取蛋白质的主要因素？ 学习要求 * * 从毛发中提取胱氨酸 胱氨酸是白色六角形板状晶体或结晶粉末，不溶于乙醇、乙醚，难溶于水。易溶于酸、碱溶液，但在热碱溶液中可被分解。 胱氨酸比半胱氨酸稳定，在体内转变成半胱氨酸后参与蛋白质合成和各种代谢过程，有促进毛发生长和防止皮肤老化等作用。 * * 临床上用于治疗膀胱炎、各种秃发症、肝炎、神经痛、中毒性病症、放射损伤以及各种原因引起的巨细胞减少症，并是治疗一些药物中毒等的特效药。在食品工业、生化及营养学研究领域也有广泛的应用。 胱氨酸存在于人发、猪毛、羊毛、马毛、羽毛及动物角等的蛋白质中，其中人发含量最高，达17.6％。胱氨酸是氨基酸中最难溶于水的一种，因此可利用这种特性，通过酸性水解，从废杂猪毛、人发、鸡毛、羊毛等角蛋白中，分离提取胱氨酸。 常规提取工艺 上清液（回收氨基酸） 废杂毛（猪毛、人发等） 清洗 干燥废杂毛 水解 水解液 中和 胱氨酸粗品 提纯 沉淀物（粗品） 滤液（弃去） 结晶 精制 干燥 精