实时PCR分析△^5脱饱和酶在花生四烯酸合成中的作用_1.docVIP

实时PCR分析△脱饱和酶在花生四烯酸合成中的作用 维普讯 h资tt:/p/www.cvqpi.cm o 国生中 工 程物杂 志 ＣａＢｏｉｃ ｎｇ ，ｌ ０ ２ （６） ６　 ５ｎｈ　 ｉｅ ｈ ｏｙ ０ ， ２ ６ ８７～ ｌ：ｔ ｏ 实时 Ｐ Ｒ 分 ５析脱 和 饱酶在 Ｃ　花 生 烯四 酸合 成中 的 作 用　 肖 　靓 刘 朱 敏　 龙余江朱 　智 　 　路 周 　蓬 蓬（ 中科技 大学命生学 与科术学技 院华 武汉４ ０ ） ３７０ ４ 　 摘要 花生四烯 酸人体的必需脂是酸肪， 具有独 的特物 生性活 脱。和酶饱是花四烯酸生生　 ５ 物 合成径 途中催 ４－ 一高 一￣ ＾ ＝麻亚酸 脱饱 和 花为生 四 酸 烯酶 。的 过通实时 定量Ｐ Ｒ 技术， 测 了 － ｙ Ｃ 　 检 饱 和脱酶 不 在同 花 生四 烯 产 酸量 高的 被 孢 山霉 （ ｒｅｅａａ ｉ ａ菌 株 Ｍ、１６和 Ｍ 中的　３Ｍ ｏｒｔ　ｌｌｎ ）ｉ ｌ ｐ ０Ｍ ２ ｍ Ｎ ＲＡ表水达平 以，及 在产花生高四酸菌烯株Ｍ ６ 培养过 中程 ｍ的Ｎ Ｒ Ａ表达 水平的 态变化 动。 　发 　 脱饱现和 酶基 的因ｍ Ｒ 表 达Ａ 水 与 花 生平四 烯 酸 的 产 生之 存间在 明 显的 线 关 系， 性明 Ｎ 表 　脱饱 和 酶在 山被孢 霉 花高生四 烯酸 合成途径 中起到 了非 常重要 的作用 。 关键　 词 脱 和饱酶 ５ 花 生四 酸烯 实 Ｐ时 Ｒ 高被山孢霉　 Ｃ 图分中 类号 ： １７ Ｑ 　 多８ 饱 和不脂 肪 酸（ ｏｕ ｓ ａ ｕｄｆ ｔ ａ ｓｉｐ ｎｌａ ｒ ｅａ　ｙ ｃ， ｙ ｔｔ 　ｔｄ 　菌种　 。Ｂ ｔ ａ等ｏ 　 发现 温低培 法养 可分以 离高产 ｈ 　Ａ的被孢霉菌 ；株ｈ等 　利 用 Ｔ ｃ红四氮 唑） Ａ ｕ ｒ（Ｚ能 被　 还原 物 性 还 原质生成 红 色 的 ＴＦ的 理 ，原现 Ｔ Ｃ 色　染发 ＩＰ Ｆ ｓ 主要包 　 括一亚 酸 （ Ｌ麻 高一一 、 麻　 Ｕ酸Ａ ）Ｇ Ａ） 二 亚 　（ Ａ Ｇ、 生四烯 酸（ Ａ 二） 碳十五 烯 酸 （ Ｐ、 Ｄ Ｌ ）花 Ａ 、ＥＡ ） 二 　 十碳二烯酸六（ Ｈ 等。Ｐ Ｆｓ Ｄ Ａ） Ｕ 的Ａ生物合成是 饱和以 脂　肪一硬酸酸为脂底 物， 经链 碳长 和延饱 脱和两个 　主要 反应来而（ １。 图 ） 在　 哺乳动细胞物中， 只 能在 脱饱位和 到油　，９ 得 酸 ，不多饱脂和肪不酸 能合成 ， 必 须从物 食中取亚摄　 油酸、 麻酸、 花生亚四 烯酸（ 三种 肪脂 酸被 称为必脂　 需 肪酸 ）这。花 生四 烯是人体 最酸要 、 重含 量丰 最富 Ｃ的 ∞　Ｐ Ｆ 主要它存于器官、 在肉血和组 织 中液，Ｕ Ａ 肌， 与磷　脂结合成 构结脂类着起 要重作。花用生四烯酸还是 许多 　十二酸衍生烯物 的接前 体直， 如前列 素 Ｅ 腺（Ｅ ２、　 Ｐ ）Ｇ 前列　环素 （ Ｇ 　、Ｐ Ｉ 血）栓 素Ａ ｘ 　（ 和 白烯 三。近十　 　等ＡＴ ） 年 的研 究发 现 ，生 四 酸烯还 可 以通过 接直或 间接 　 花的 深与被孢霉 浅 中ＡＡ 量含正呈相 关的关系 ，并利用 Ｔ ｒ　 染色ｃ筛法选出了高产 Ａ Ａ菌株 Ｍ ， ６ 这都 些暗示Ａ Ａ　的 产高与脱 和反饱有应 很的大系 。 关　脱 和酶是饱 催 化 Ａ 　Ａ形的最成一后步饱脱反和应的 酶 我，在们前研　 期 中从高究产 ＡＡ菌高 山株被霉孢Ｍ ６ 克中 隆该了基因　 完整的 ｃ Ｎ 并 首 次在且 斯巴德毕 赤母酵中 表　 。 达ＤＡ， Ｊ　现 过实时通 量 Ｐ Ｒ定技术 ， 在究不同 Ａ 研 ＣＡ量产 的高 　被山孢霉及高产 菌以株 Ｍ ６不 同的 Ａ Ａ产 阶段生， 　 脱和饱酶因基转的表达录水平， 评 该价在 Ａ Ａ生物合酶　成中的作用 ，为进一利用代谢步程构工高建 产ＡＡ 株菌 　的研究 打下基 础 。 途径　调节种器多 官组织 或各的离种 子道通 ，而对 　心 从脏 、 　　脑 滑、肌 　 等 起 节 调 用 作。 高 被 山 孢霉 平 　 （ｅ Ｕ ｒｌ　ｎ ） 一种丝 状 真 菌 ， 以 在碳 水化 合　 Ｍ ｉｏｅａ ｉ ａ是ｔｒ ｐａ 它 １ 材 料 方与 法 　１１ 菌 ． 株 　 山高被霉（孢 　胍 ） 池 ｉａ） ６ Ｉ 、 Ｍ２ ｎｌＭ