分子遗传学3摘要.pptVIP

第四章 DNA的复制 复制（replication）：是指以原来的DNA 分子作为模板合成出相同分子的过程。 复制在保持生物稳定性方面起重要作用； 复制是细胞分裂的前提和基础； 复制是精确的复制，一般不会差错； 复制方式为半保留复制（semiconservative replication）。 第一节 半保留复制的验证 半保留复制：新合成的每个子代DNA分子中，一条链来自亲代DNA分子，另一条链是新合的，这种复制方式被称为半保留复制。 半保留模型 （semioconservetive model） 全保留复制模型 (conservetive model) 分散模型 (Dispersive model) 验证半保留复制的实验 Meselson-Stahl实验 Taylar实验 姐妹染色单体差别染色方法 Cairns复制模型—θ型复制  下图为 Taylor 蚕豆根尖放射自显影实验： （a）按半保留复制预期DNA在复制过程中标记情况； （b）实验结果染色体放射自显影的图示。 第二节 复制的起点、方向和终点 一. 研究方法： 1. 用同位素标记电镜观察及变性法 2. 用噬菌体插入标记法 同步培养 不同步培养 3. 变性定性法 4. 双向电泳法 二、原核的复制起点和方向 复制起点（origin,ori）：DAN分子上特定的发动复制 的起始位点。 复制终点（terminus）：DNA分子上复制终止的位点。 复制子（replicon）：从复制起点到复制终点这样一个 完整的DAN单位称为复制子。 原核细胞基因组实质为一条双链DNA分子，作为一个复制子，整个基因组的复制起始于单一位点（起点）； 真核细胞基因组庞大，有多个复制起点和复制终点，含有多个复制子。 复制特点： E.coli定点、双向对称复制; 枯草杆菌有固定的起始点，双向不对称复制; 质粒R6K早期为单向复制，复制了约1/5基因 组时进行双向复制; 质粒Col E1有固定起始点，但却为单向复制; mt DNA进行D（displaced loop）环复制。 D环复制 第三节 原核生物复制的酶系统 考察基因功能的常用方法------突变体的表型变化 考察复制有关酶的常用方法------温度敏感突变体 利用大肠杆菌温度敏感突变体------复制有关基因(dna) 快停突变体：温度升高，复制立即停止。缺失复制体组分的 酶，特别是延伸的酶或参与供应关键前体的酶。 dna突变体 慢停突变体：在非允许温度下，可以完成当前的复制，但不 能开始新的复制。缺失复制起始有关的酶。 一、DNA聚合酶(DNA polymerase) DNA聚合酶的共同特点： 需要提供合成模板； 不能起始新的DNA链； 必须要有引物提供3→OH； 合成的方向都是5→3； 除聚合DNA外还有其它功能。 E.coli 中的三种DNA多聚酶 （一）DNA聚合酶I的结构 DNA聚合酶有6个结合位点； 模板结合位点； 引物结合位点； 引物3－OH结合位点； 底物dNTP结合位点； 5→3外切酶结合位点； 3→5校正位点。 （二）DNA聚合酶Ⅰ的功能 1. 5’→3’聚合功能； 2. 3’→5’外切活性； 3. 5’→3’外切活性； (1)切口平移（nick translation）； (2)链的置换； (3)模板转换（template-switching）； 4. 内切酶活性。 （三）DNA多聚酶Ⅲ的结构 全酶在DNA上的装配分为三个阶段 一个β二聚体加上一个γ复合体识别引 物模板形成一种前起始复合物； DNA在于β,γ复合体结合的位点构象 发生改变，而对核心酶产生了高亲和力 使核心酶能与DNA结合； τ二聚体结合核心聚合酶，使其二聚化。 二、DNA连接酶（DNA ligase） 作用是连接DNA分子，封闭缺口。分三步进行： 1. E＋ATP→E－AMP＋ppi 在E.coli中：E＋NAD→E－AMP＋NMN 2. E-AMP上的AMP转移到DNA的5’ -PO4上使其活化； 3. 活化的5’ －PO4与相邻的3’－OH作用形成3’ －5’ 磷酸二酯键，并释放出AM