国家自然科学基金申报攻略—培训课件.ppt

研究内容 做什么？ 围绕研究目标进行 小题大做 要有层次：如基因转录水平、蛋白质表达水平、细胞水平、动物模型、人体。 内容要细化 制备血管内皮细胞TFPI-1条件基因敲除小鼠：将TFPI-1 LoxP小鼠和血管内皮细胞Tie2-Cre转基因小鼠交配，获得血管内皮细胞TFPI-1基因条件敲除杂合子和纯合子小鼠，应用Southern Blot和PCR方法进行基因型鉴定。 血管内皮细胞TFPI-1条件基因敲除小鼠不同发育阶段血管内皮细胞表型和血管形成变化分析：取E12小鼠胚胎、出生后当天小鼠、3.5周龄幼鼠和7周龄性发育成熟小鼠，处死后分别取主动脉、心脏、肺脏和大脑，分别对各部位血管进行病理学和电子显微镜检测。应用TUNEL法原位检测血管内皮细胞的凋亡情况。 血管内皮细胞TFPI-1条件基因敲除小鼠对细菌内毒素的反应：选择6-7周龄发育成熟小鼠，静脉注射小、中和大剂量细菌脂多糖LPS，取血处死小鼠，检测血液中关键炎症因子NF-кB、TNF-α和IL-1β水平，病理学检测肺脏和大脑的炎症情况。 乳腺癌细胞在血管内皮细胞TFPI-1条件基因敲除小鼠血液中转移能力的评价：选择6-7周龄发育成熟小鼠，静脉注射三种不同数量的MDA-MB-231乳腺癌细胞，饲养4-6周后处死，取肺脏进行病理学检测，观察乳腺癌转移情况。 拟解决的关键问题 关键科学问题与关键的技术问题 与研究目标和研究内容相对应，精练，准确。 TFPI-1主要由血管内皮细胞产生，它的抗凝机制已经明确，其表达水平在动脉粥样硬化、心脑血管疾病、炎症和恶性肿瘤中也发生显著变化。由于TFPI-1基因敲除小鼠全部在胚胎死亡，因此难以理解它在血管内皮细胞功能维持，以及在上述疾病发生发展过程中的确切作用。本课题通过制备血管内皮细胞TFPI-1条件基因敲除小鼠，系统观察血管内皮细胞在缺乏TFPI-1时的形态学和功能学变化，并明确TFPI-1炎症反应和恶性肿瘤血道转移中的作用，以回答TFPI-1具有除抗凝作用以外，是否还有确切的其它生理功能这个关键科学问题。 拟采取的研究方案 怎么做？ 围绕研究内容进行设计，从多角度说明问题 切忌罗列研究方法而不作任何说明和解释 要具体，针对每个具体问题提出切实可行方案 尽可能使用绉典的、公认的研究方法。如果使用新方法，解释其比绉典方法的好处、可信度等 杀鸡不需宰牛刀… 简述具体的实验方法，使评审者相信申请人确实掌握了该方法。 技术路线 可行性分析 让审阅人相信你能够完成研究计划 学术思想 研究方案 研究基础 研究条件 研究人员 设计的合理性和可完成性 要客观，不要夸大 特色与创新 是指前人未曾有过的新学术思想、理论、模型、研究方法、手段和应用性结果 切忌重复前面论述过的话 针对可能的结果进行归纳 数量不宜过多 要注意研究条件的特色不能代表项目的研究特色，更不能代表新颖的学术思想 应用Cre-Lox P方法制备血管内皮细胞TFPI-1基因条件敲除小鼠； 应用血管内皮细胞TFPI-1基因条件敲除小鼠判断TFPI-1对血管内皮细胞 功能的影响； 应用血管内皮细胞TFPI-1基因条件敲除小鼠判断TFPI-1对炎症反应和肿 瘤血道转移的影响。 年度研究计划 包括拟组织的重要学术交流活动、国际合作与交流计划等 至少以半年为一阶段，最好以季度为节点。 一定要有预期结果 预期研究结果 成功制备血管内皮细胞TFPI-1条件基因敲除的小鼠； 血管内皮细胞TFPI-1条件基因敲除小鼠的血管内皮细胞可能出现凋亡，细胞之间的缝隙连接增宽，细胞表面可能出现纤维蛋白沉着，血管中膜增厚，血管腔狭窄。这些变化在胚胎期、幼鼠和成熟小鼠可能程度不同。 血管内皮细胞TFPI-1条件基因敲除小鼠血管壁的炎症反应增强，表现为炎性细胞增多，炎性因子表达增加，严重时可能出现肺泡表面透明膜形成、血液渗出，甚至发生弥漫性血管内凝血。 癌细胞静脉注射至血管内皮细胞TFPI-1条件基因敲除小鼠血液中后，与对照组相比，肺部、骨髓、脑部形成转移瘤的时间提前，肿瘤生长速度加快。 国内外发表高水平论文3-4篇，其中本学科高水平国际刊物论文2-3篇。 培养研究生4-5名。 与目标和研究内容对应 文章和专利的数量和质量 工作基础 与本项目相关的研究工作积累和已取得的研究工作成绩 是课题申报不可或缺的内容 详细阐明 基础应充分，适度 内容包括已发表的文章、图片等。 工作条件 包括已具备的实验条件，尚缺少的实验条件和拟解决的途径，包括利用国家实验室、国家重点实验室和部门重点实验室等研究基地的计划与落实情况 主要写本单位条件 合作单位条件不要过分强调 申请者简历 申请人和项目组主要参与者的学历和研究工作简历，近期已发表与本项目有关的主要论著目录和获得学术奖励情况，在本项目中承担