细胞培养污染简介解析.ppt

4.3，细胞培养中内毒素的监控：为排除血清、LIF和bFGF中内毒素的污染，细菌内毒素检测是非常重要的。中国科学院干细胞库只使用细菌内毒素小于1EU/ml的血清、LIF和bFGF等各种生长因子。 4.4，内毒素监控是细胞用于临床治疗所必须的。 目前各类临床级干细胞尚无统一的国际、国内标准，这是胚胎干细胞进入实际应用阶段的最大障碍之一，也是细胞库水平的一个重要标志。但是在制药工业中内毒素是必须去除的。因此，中国科学院干细胞库强调高标准严要求，把内毒素监控作为细胞培养的常规标准。 鲎试剂凝胶半定量法检测（参考2010年版《中国药典》） 4.5，内毒素检测方法 鲎试剂：鲎科动物东方鲎的血液变形细胞溶解物的无菌冷冻干燥品，含有能被微量细菌内毒素激活的凝固酶原（Proclotting enzyme）和凝固蛋白原（Coagulogen）。在适宜的条件下（温度，pH值及无干扰物质），细菌内毒素激活鲎试剂中的凝固酶原，使鲎试剂产生凝集反应形成凝胶。凝胶法鲎试剂是根据反应所形成凝胶的程度来检测样品内内毒素的含量。 5，细胞间交叉污染 Hela细胞是第一株源细胞系。1952年建系以来，现在世界上已建有几千株细胞系，为我们的生物医药事业提供研究材料。但是随之而来的细胞间交叉污染以及细胞系错认现象必须得到重视。 细胞间交叉污染 /databases/cross-contaminations (International Cell Line Authentication Committee, ICLAC) 超过400种细胞系已被鉴定为错认的细胞系 防止细胞交叉污染 （1）在进行多种细胞培养操作时，所用器具要严格区分，最好做上标记便于辨别。并严格按顺序进行操作，避免一起进行操作时易发生混乱。 （2）在进行换液或传代操作时，注射器和滴管不要触及细胞培养瓶瓶口，以免把细胞带到培养液中污染其他细胞。 （3）所有细胞一旦购置，或从别处引入，或自己建立，均应及早留种冻存，一旦发生污染可弃之，重新复苏留种细胞进行培养。 每一株细胞都有独特的来源。因此，对于有疑问的的细胞株，可进行同工酶或STR(short tandem repeat，短片段重复序列)检测进行身份鉴定。STR广泛存在于人类及哺乳动物的基因组中，具有高度多态性，它们一般由2-6个碱基构成一个核心序列，核心序列串联重复排列，由核心序列重复数目的变化产生长度多态性。对于一个特定的个体，染色体上某个特定位置的重复序列的重复次数是固定的，而对于不同的个体在同一位置处的重复次数可能不同，这就构成了人群中这些重复序列的多态性。由于人类基因组中这种重复序列非常多，通过对这种多态性的检测，就可以明确区分个体与个体的不同，确定父母子的亲缘关系。 近年来，大量研究表明STR基因分型方法是进行细胞交叉污染和性质鉴定的最有效和准确的方法之一，STR基因分型应用于细胞鉴定已被ATCC等机构强烈推荐。 细胞交叉污染的检测 国内尚无这方面的报导...... 任重而道远，吾将上下而求索 谢 谢 ！ 我们的地址：上海市徐汇区岳阳路320号  细胞库/干细胞库 网址： 联系方式：021tygu@ 顾老师 人有了知识，就会具备各种分析能力， 明辨是非的能力。 所以我们要勤恳读书，广泛阅读， 古人说“书中自有黄金屋。 ”通过阅读科技书籍，我们能丰富知识， 培养逻辑思维能力； 通过阅读文学作品，我们能提高文学鉴赏水平， 培养文学情趣； 通过阅读报刊，我们能增长见识，扩大自己的知识面。 有许多书籍还能培养我们的道德情操， 给我们巨大的精神力量， 鼓舞我们前进。 细胞系的重要性 * 今天要讲的两点 * 保存细胞系的地方叫细胞库。这是细胞库目前的功能。 * 为了提升细胞库的创新能力，保藏利用开发。这是我们的探索。 * 第一部分总结 * 第二部分 * * * 细胞培养中污染物的预防与清除 丁小燕 中科院上海生化细胞所 2016，Jan，22-24 中国科学院生物 遗传资源评价与组学应用技术 培训班 培训班目的： 提高各生物资源保藏库在资源保藏、评价方面的科技创新与服务能力。 资源保藏、评价 创新能力 服务能力 （科学院对我们的要求） ? 十八大明确提出要“实施创新驱动发展战略，强调科技创新是提高社会生产力和综合国力的战略支撑，必须摆在国家发展全局的核心位置”。 ? 我国科技服务业已经具备一定的发展基础，但是与英、美等发达国家相比，我国的科技服务业产值及其占GDP比重较低，2011年度实现科技服务增加值不足7000亿元，占GDP比重约为1.4%。 ? 2014年10月，国务院印发《关于加快科技服务业发展的若干意见》（国发〔2014〕49号），这是国务院首次对科技服