三疣梭子蟹肌肉乳化病的同工酶病理变化研究.PDFVIP

三疣梭子蟹肌肉乳化病的同工酶病理变化研究 陈寅儿，王国良，金 珊，李 政 （宁波大学生命科学与生物工程学院, 浙江 宁波 315211 ） 摘要：采用垂直平板聚丙烯酰胺凝胶电泳技术（PAGE ），对患有肌肉乳化病的三疣梭子蟹（Portunus trituberculatus ）3 种组织中 10 种同工酶及肌浆蛋白的酶谱表型进行分析,并就患病后酶谱变化特征及原因 进行了讨论。证实在部分组织中，除SOD 酶外9 种酶及肌浆蛋白的酶带均出现明显的紊乱现象,表明病蟹 的病理机制极可能与代谢异常有关,其特异性变化可以作为疾病早期诊断及病理分析的生化辅助指标。 关键词：三疣梭子蟹（Portunus trituberculatus ）；肌肉乳化病；同工酶 中图分类号：Q55 文献标识码：A 文章编号：1000-3096 （2008 ）05-0036-04 肌肉乳化病是近年来三疣梭子蟹（Portunus 腺和心脏。 trituberculatus ）养殖业中新出现的一种流行病，该 2 结果 病具有感染速度快、流行面广、死亡率高等特点， 危害十分严重[1] [2] 2.1 同工酶的筛选 。已有学者对该病的病原 、流行 情况及防治措施[1]进行初步的研究，但在同工酶病 本实验运用聚丙烯酰胺凝胶电泳共筛选出具 理变化方面，还未见报道。作者研究了患乳化病后 有清晰图谱的下列 10 种同工酶进行同工酶病理分 梭子蟹的 10 种同工酶及肌浆蛋白的病理变化，旨 析：过氧化氢酶（CAT，E.C. 1.11.1.6 ）、酸性磷酸 在为深入探讨肌肉乳化病的病理机制及开展诊断 酶(ACP ，E.C. 3.1.3.2) 、碱性磷酸酶（AKP ，E.C. 防治工作积累基础资料。 3.1.3.1 ）、酯酶(EST ，E.C.3.1.1.1) 、 a- 淀粉酶 1 材料与方法 (a-AMY,E.C.3.1.1.1) 苹果酸脱氢酶 (MDH ，E.C. 1.1.1.37)、苹果酸酶（ME ，E.C. 1.1.1.40 、谷氨酸脱 1.1 材料 氢酶(GDH，E.C.1.4.1.2) 、超氧化物歧化酶（SOD， 实验用健康及患病梭子蟹于2003 年 10 月取自 E.C. 1.15.1.1 、三磷酸腺苷酶（ATP ，E.C.2.7.4.3 ）。 浙江舟山，平均体质量为 0.08~0.12 ㎏。每只蟹经 2.2 同工酶病理分析 形态学测量鉴定后，分别取肌肉、肝胰腺和心脏组 ACP 单体或者二聚体酶，患病与健康梭子蟹 织用双蒸水冲洗干净，滤纸吸干水分。各称取0.4 g 冰 的差异为：病蟹肌肉和心脏组织中ACP-1 酶带活性 浴研磨。匀浆液抽提，4 ℃下 13 000 r/min 离心30 min。 异常增高。而肝胰腺组织中 ACP-2 酶带活性相对增 移取上清液，分装至0.5 mL 大号离心管，保存于−71℃ 高( 图 1-1)。 超低温冰箱中,病蟹与健康蟹的组织取样均取 6 只 AKP 单体或者二聚体酶，患病与健康梭子蟹的 以上蟹混合使用。 差异出现在肝胰腺和心脏两种组织中。病蟹肝胰腺 1.2 电泳与染色方法 中AKP-1 活性增强,且增加了 AKP-2 酶带表达，心 采用垂直平板聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE) 。经 脏中 AKP-2 失活。肌肉组织中 AKP 酶的表达无显 筛选