第二章植物组织培养(园艺)课件资料.ppt

* 培养基灭菌方法 -------湿热灭菌法 培养基湿热灭菌最少时间 液体容积（ml） 121℃所需时间（min） 20---50 15 75 20 250---500 25 1000 30 1500---2000 35---40 * 培养基高压蒸汽灭菌（湿热灭菌）操作 P20 灭菌后培养基的存放： 锅内加水 放入消毒桶 装入培养基 盖好锅盖 接通电源加热 排尽锅内冷空气 达到灭菌温度时开始计时并保持足够长的时间 继续加热 切断电源 压力表指针归零时打开锅盖 取出培养基并存放好 * 高压蒸汽灭菌锅安全使用注意事项： ① 灭菌前外层锅内要加入足够的水,灭菌完成后要将锅内的水排放干净。 ② 在灭菌过程中及灭菌后，压力表压力指针归零之前,不能打开锅盖,以免发生危险。 ③ 注意日常维护和检查,及时发现问题,及时修理，保证使用安全可靠。 * 使用高压蒸汽灭菌锅进行物品灭菌时的注意事项： ① 消毒锅内放置的物品要有一定的缝隙，便于高温蒸汽上下回流，达到良好灭菌效果。 ② 锅内冷空气必须完全排尽，否则压力表的指针虽然达到了规定的压力，但由于锅内冷空气的存在，并不能达到相应的温度，因而影响灭菌效果。 ③ 进行培养基灭菌时，锅内达到规定的灭菌温度后，在严格保持灭菌温度的同时，还要严格保持灭菌时间。时间过长会破坏培养基内一些化学成分的有效性，时间过短则达不到灭菌效果。 2.3.2.3 无菌操作室内的灭菌方法 熏蒸灭菌法 射线灭菌法 2.3.2.4 外植体的表面灭菌 P29 化学消毒剂灭菌法 抗生素抑菌法 * * 1.外植体灭菌的常用杀菌剂 良好的外植体灭菌效果的含义： 外植体灭菌后无菌率高，同时植物细胞不会受损伤或只是轻微受损伤而能保持正常生长。 * 2.外植体表面灭菌 外植体表面灭菌操作前的准备工作： ① 无菌水、漂洗瓶、切割用器皿（玻璃培养皿或不锈钢切割盘）和金属器具均经过高温高压灭菌并整齐摆放在超净工作台上。 ② 灭菌剂配制好并整齐摆放在超净工作台上。 * * 外植体表面灭菌的一般过程 预处理： 外植体取材 备用 无菌水充分漂洗3～5次 无菌条件下，消毒剂处理 无菌条件下，70%酒精表面消毒30S～60S 预处理 * 3.影响外植体消毒效果的因素： ①消毒剂种类 ②消毒剂使用浓度 ③消毒处理时间 4.培养过程中污染原因及对策 污染的病原类型 污染发生原因 防污染对策 * 2.3.3 外植体的接种 1 定义 2 外植体接种操作前的准备工作 接种室的清洁和灭菌 超净工作台的清洁和灭菌准备 操作人员无菌操作前的准备 3 外植体接种的具体步骤 切割外植体 培养瓶倾斜靠近酒精灯火焰 瓶盖外部在火焰上旋转灼烧数秒钟 旋开瓶盖，扣放在酒精灯旁边 瓶口在火焰上旋转灼烧数秒钟 用无菌镊子将外植体均匀放置在培养基上 瓶盖在火焰上灼烧两圈 盖紧瓶盖 * * * * 2.4 离体培养体系的建立 供体植物材料的确定 外植体的选择 外植体的灭菌 外植体的培养 外植体的接种 * 2.4.1 供体植物材料的来源 田间材料 温室材料 无菌发芽材料 2.4.2 外植体的选择原则 再生能力强 遗传稳定性好 外植体来源丰富 外植体灭菌容易 * 2.4.3 常用外植体的种类 茎尖 带节茎段 节间部茎段 叶片和叶柄 鳞片 * 2.5 外植体的培养条件 温度 光照 湿度 培养基的营养物质和pH变化 培养物的气体环境 * 第二章 作业： 组培实验室有哪些实验室组成，分别讲述这些实验室的功能？ 设计组培实验室有哪些注意事项？ 高压蒸汽灭菌锅安全使用注意事项？ 使用高压蒸汽灭菌锅进行各种器皿、器械及培养基灭菌时要注意哪些？ 培养基中的主要成分有哪几类？ 培养基中常添加的植物生长调节物质有哪两大类？各包括哪些常用种类？培养基中使用浓度范围？ * 培养基中经常加入的生长素类和细胞分裂素类物质各有何作用？这两类激素的使用规律如何？ 上述两类激素母液如何配制？激素母液浓度范围？ 培养基的配制程序？培养基配制过程中要注意哪些问题？ 已经污染的培养器皿如何清洗？ 外植体污染原因？ 污染的病原类型？ 防污染对策？ 影响外植体消毒效果的因素？ * 外植体的