第二章植物组织培养原理资料.ppt

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 1、直接途径：指从外植体某些部位的胚性细胞直接诱导分化出体细胞胚胎，如子叶、花序、珠心等外植体。 Direct somatic embryogenesis in Brassica napus 外植体先脱分化形成愈伤组织，再由愈伤组织的某些细胞重新“决定”为胚性细胞，进而分化出体细胞胚胎。多数体细胞胚胎通过该途径形成的。通常包括2个阶段： （1）胚胎发生丛（Embryogenic clump）EC是由液泡小、细胞质浓的小细胞构成。 （2）胚状体的发育。将EC转入降低或除去生长素、降低还原氮的培养基上培养即可。 Somatic Embryogenesis Induction in Delonix regia (Boger.) Raf (Royal Poinciana) 花椰菜体胚发育的不同阶段 菊花花瓣体细胞胚胎发生及体胚发育过程的扫描电镜观察 四、体细胞胚胎发生的机理 1、体细胞胚胎的起源： 起源存在争论，但绝大多数体细胞胚胎起源于单细胞。 细胞胚发生的实质是细胞分化，即细胞在离体培养条件下，诱导部分基因开放，实现遗传信息的表达。 2、体细胞胚胎发生机理： 体胚具有两个明显特点：极性和生理隔离 极性：单个胚性细胞第一次分裂多为不均等分裂，顶细胞继续分裂形成多细胞原胚，基细胞进行少数几次分裂形成胚柄。极性获得的诱因是激素和外界刺激。 生理隔离：在早期胚性细胞与周围细胞存在胞间连丝，但是随着胚性细胞的发育，细胞壁加厚，胞间连丝消失或被堵塞（类似小孢子发生）。 3、体细胞胚胎发生过程中的的生理生化： （1）蛋白质与核酸代谢； （2）多胺代谢变化； （3）糖类、矿质营养变化； （4）内源激素变化； （5）活性氧代谢变化 。 一、植物种类和基因型 1、植物种类不同难易程度不同；被子植物比裸子植物容易。 2、同一物种不同基因型间存在较大差别。 二、培养材料的生理状态 1、发育年龄：一般幼态比老态组织形态发生能力高； 2、培养器官或组织类型：细胞分裂旺盛的器官较好； 3、培养时间和细胞倍性：一般取处于旺盛生长期的愈伤来诱导器官形成；花药培养（单倍体花粉细胞与二倍体花药）。 1、营养成分 一般认为，培养基中的铵态氮和K+有利于胚状体形成，提高无机磷的含量可促进器官发生。 茎尖培养和芽诱导培养基主要是MS及其修改的培养和B5培养基。 茎尖培养的起始培养基和芽增殖的培养基往往是不同。 碳水化合物种类及浓度对胚状体发育有重要作用。缺糖或低糖无法形成胚状体。 （1）生长素：促进外植体生长、生根，并与细胞分裂素共同诱导不定芽分化及侧芽萌发与生长。2，4 – D诱导体细胞胚胎发生。 （2）细胞分裂素：促进分化和芽形成，抑制根发育及衰老。 （3）赤霉素：GA3促进茎的伸长，打破休眠，对芽的诱导和形成有促进作用。 （4）乙烯：对芽的诱导和形成有促进或抑制作用 （5）脱落酸：对体胚的发生及成熟很重要，可增加胚性愈伤组织的形成和体胚发生。 （1）愈伤组织诱导：在固体培养基上（胡萝卜、石刁柏）。 （2）细胞和胚状体的诱导：在液体培养基上。 （3）pH显著影响芽的生成（pH=5.8） （4）诱导胚状体发生或早期胚状体培养：渗透压，前低（2%）后高（5%）. 1、光照 培养条件下，光照的作用是影响细胞的状态，而不是光合作用。连续光照有利于培养细胞维管组织的形成。昼夜光照有利于极性的建立及形态发生。 光强一般要求1000-5000lx。植物间有所差别。 光照周期为10~16h/日。不同波长光质作用不同，蓝光有利于芽的分化，红光有利于根系发生。 2、温度： 大多数培养温度为25±2℃. 花药培养低温或高温预备处理。 3、气体： 氧气、二氧化碳以及乙烯等气体的浓度和通气状况。 基本概念：植物细胞全能性、细胞分化、 脱分化、再分化 植物离体培养中再生植株有哪些途径？ 愈伤组织是如何形成与生长的？ 植物体细胞胚胎发生有哪些途径？ 影响植物离体形态发生的因素有哪些？ * * * * * * * * * * * * * * * 脱分化诱导期间会导致细胞膜透性改变，细胞核增大，内质网范围扩大，多核糖体形成，过氧化物酶增加，蛋白质和酚类物质合成活跃等。但目前对于脱分化的机理尚未完全阐明。 2、脱分化的机理 （1）损伤。切割损伤的刺激，促使细胞增殖。 （2）在诱导愈伤组织时常加入生长素类