肺炎克雷伯菌的耐药基因序.docVIP

产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌的耐药基因序列分析 摘要：目的研究大庆地区产超广谱β-内酰胺（extended-spectrumβ-lactamases, ESBLs）肺炎克雷伯菌的基因型分布及序列变化。方法 采用聚合酶链反应（PCR）扩增对分离14 株耐药性强的产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌株的TEM 型、SHV 型、CTX-M1 型、CTX-M2 型、CTX-M8 型、CTX-M9型、OXA 型ESBLS 基因，1%琼脂糖凝胶电泳，回收DNA 片段，测序分析各基因型在耐药的产超光谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌株中的分布。结果 TEM-1、SHV-1、CTX-M-1 基因扩增阳性数分别为4、4、7、4、2。结论 分离的ESBLs 阳性的肺炎克雷伯菌存在多个耐药基因。 关键词：超广谱β-内酰胺酶；肺炎克雷伯菌；耐药性；基因型 Sequencing analysis of drug resistance gene of ESBL -producing Klebsiella pneumoniae Abstract：Objective To investigate the genetic distibution of extended-spectrum β-lactamases- (ESBLs ) producing Klebsiella pneumoniae in Daqing City. Methods The genotypes of TEM, SHV, CTX -M -1 ESBLs gene of ESBL -producing Klebsiella pneumoniae isolated from inpatients in Daqing oilfield general hospital were amplified by using PCR and the DNA fragments were recovered after electrophoresis with 1%aglucose gel. Then seqquence analysis was conducted for investigating the distribution of drug resistant genetic strains of Klebsiella pneumoniae. Results The positive rates of genotypes of TEM, SHV, CTX-M-1 ESBLs gene were 58.0% ,90.3% , 16.1%, respectively. Conclusion There are several drug resistant genotypes in the isolated ESBLs – producing Klebsiella pneumoniae. Key words: ESBLs；Klebsiella pneumoniae；Drug resistance；Genotype 超广谱β－内酰胺酶（ESBLs）主要分布于医院环境中，其基因多编码于可移动的质粒中，并由质粒介导的能赋予细菌对青霉素类、头孢菌素类、单环B2内酰胺类药物耐药的一类酶, 产ESBL s 的细菌有较高的交叉耐药和多重耐药性特点 [1]。ESBLs 的编码基因可随质粒在同种或不同种革兰氏阴性细菌间传递，对临床就诊和住院病例构成危害。迄今为止已发现ESBLs 200 多种，主要为TEM 型，SHV型，CTX-M 型和OXA 型，PER、VEB、GES、BES 等少见类型也在增加[2]。TEM 及SHV 型ESBLs 通常编码TEM-1 和TEM-2 和SHV-1 的结构基因突变，导致酶活性中心附近的氨基酸残基被其他氨基酸或衍生物取代。由于各地区使用抗菌素种类及剂量不尽相同，因此对本地区产超广谱β-内酰胺酶的肺炎克雷伯菌基因型开展研究，及时准确检ESBLs，对防止ESBLs 流行、控制医院内感染和指导临床治疗有着非常重要的意义。为此，我们对大庆油田总医院2009 年分离的16 株耐药性强的产ESBLs 肺炎克雷伯菌的基因型进行研究。 1 材料与方法 1.1 菌株的来源 2009 年1月~2009年12月大庆油田总医院住院患者痰、尿、血液、胸腹腔积液和各种创面分泌物中分离耐药性强的产ESBLs 肺炎克雷伯菌14 株。 1.2 试剂及仪器 DNA 分子量Marker （DL2,000TM DNAmarker）、dNTP、TaqDNA 聚合酶、PCR 离心管购自TaKaRa 公司；Tris,琼脂糖（BBI 公司）；PCR 扩增仪（BIO-RAD C1000TM Thermocycler）；凝胶成像系统（美国K