细胞形态结构观察医.pptVIP

第三章 细胞形态结构观察技术;一、活体细胞的观察和摄影技术;2.相差显微镜 P62图3-4 适用：可增强活细胞同背底反差，帮助看清 细胞的轮廓和细胞内细微结构，如： 核仁、染色质、线粒体等。 构造特点：有两个附加构件： 相差接物镜：其光学系统中有一个光环透镜 相差聚光器：内有数个相位板，使用时与物 镜倍数一致 技巧：细胞培养瓶质地均匀透明较好，最好用塑 料瓶；观察摄影时，瓶壁要擦净；光轴对 正，照明度适宜，摸索试调至最佳;3.荧光显微镜 P67图3-6 适用：观察细胞内天然的荧光物质，如维生 素、脂褐素、核黄素等，也可观察可与 荧光染料结合的细胞组分。 构造特点：与普通光镜比，区别在于用高压汞灯光源，波长可激发荧光物质产生荧光；滤光片不同。 技巧：观察必须是自发荧光或经荧光染色的标本；选用效果最好的滤光片；荧光标本易褪色，不能长期保存，观察操作要迅速，作好记录；仪器的高压汞灯光源启动后15分钟内不得关闭，关闭后，灯冷却后方可再起动，否则寿命大减，长时间观察标本时，需带护目镜。 ;4.暗视野显微镜 P64图3-5 适用：观察记录活细胞或细胞器的运动轨迹， 提高分辨率 构造特点：只有聚光器不同于普通显微镜，设 有一个中央遮光板使照明光线不能直射。 标本进入目镜，只许标本散射光进入目 镜 技巧：物镜的数值孔径必小于聚光器的数值孔 径；盖玻片，载玻片应清洁无痕；聚光 镜和载玻片之间加香柏油，保证效果。;二.显微摄影技术 p68;;;;CCD IMAGE SENSOR外形;彩色CCD的组成结构分图;;5.缩时显微摄影术 适用：记录细胞或细胞器连续动态变化过程 正常时态连续拍照 缩时逐格拍照 主要装备：倒置显微镜，16mm摄影机，自控 缩时启动拍摄装置。 原理：缩时间隔时间：目标物实际活动时间 X 1/24 影片排成后要求放镜时间 =3600秒 ／10秒 x 1／24=15秒 所以，每隔15秒摄取1张照片。;三、光镜下的固定细胞观察法（组胚，病理） 细胞器培养皿内铺盖片单层培养 取盖片 细胞悬液 离心沉淀 涂片 固定 染色 观察 拍照 （固定剂，染色剂知识介绍） 固定剂的作用：穿透，固定，保形，防腐 固定剂的选择：P83;;四、激光扫描共聚焦显微镜技术（实验中心） 1.概念和原理 P76 laster scanning confocal microscope LSCM 激光共聚焦显微镜是20世纪80年代以来发展起来的 一项细胞生物学和高分子材料科学领域的高科技分 析仪器。; 其在传统光学显微镜基础上，利用激光作 为光源，经照明针孔可形成点光源照射荧光样品， 所产生的激发光斑被探测器针孔以共轭的形式接收 于同一焦平面上，可通过计算机控制显微镜移动， 以实现在同一焦平面（x-y)上的逐点扫描。计算机以像点的方式在计算机屏幕上形成图像。 同时，也可沿z轴方向逐渐改变焦平面，完 成对样品厚片不同层面的扫描，进行类似CT断 层扫描的无损伤连续光学切片，经计算机三维重 建处理，可形成观察标本的三维结构图形。;2.LSCM的主要组成部分及工作原理 ①激光光源:氢离子激光,能同时 / 顺序 / 分别输出紫外光和可见光 ②照明针孔:使激光通过照明针孔后形成点光源,点光源具有方向性强,发散小、亮度高等优点 ③光束分离器：可将样品经点光源照射所激