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转基因动物及克隆动物;内 容;第一部分 转基因动物;;1982年 Palmiter-“超级巨鼠” 华盛顿大学的Palmiter将大鼠的生长激素基因注射到小鼠受精卵内,?培育出体型明显大于正常小鼠的超级鼠,?成果轰动一时。;转基因小鼠A生长速度要比普通小鼠B的生长速度平均快50%。 ; 1982年 Palmiter “超级巨鼠”;;1987年 世界上第一只商业化转基因  绵羊诞生(Roslin研究所) 1989年 精子载体法应用于转基因动物 1997年 转基因克隆动物(Roslin研究所) 转基因克隆羊Polly:携带有人凝血 因子Ⅸ 1999年 上海遗传研究所宣布转基因试 管牛“滔滔”诞生 ; 三十几年里，转基因动物技术飞速 发展，转基因兔、转基因猪、转基 因牛、转基因鸡、转基因鱼等陆续 育成。转基因动物技术已广泛应用 于生物学、医学、药学、畜牧学等 研究领域 ;转基因鼠;;全球首只转基因猴“Andy”;转基因鱼;转基因试管牛“滔滔”;英国1990－2000年科研中使用转基因动物的比例图; 三十年来，转基因动物经历了 兴起——高潮——现在相对平稳的过程。 其重要意义在于人为实现动物物种之间，甚至动物与植物、微生物之间遗传物质的交换与重组。 如： 改变动物性状 导入抗病基因;二、转基因动物的概念;三、转基因动物培育原理 ;四、方 法; 精子载体法;（一）显微注射法 （以培育转基因小鼠为例）;1.方法 ;显微注射制作转基因动物流程图;2.具体步骤;显微注射仪;拉针仪;（2） 受精卵的采集;受精卵的采集;受精卵的消化、培养;注射前;（4） 受精卵的移植;受精卵的移植;（5） 得到founder转基因小鼠（6） 对founder转基因小鼠进行鉴定、筛选、杂交获得纯合转基因小鼠;（二）逆转录病毒法;关于逆转录病毒;原 理;关键步骤;（2）包装细胞? 决定着重组病毒效价及其宿主范围。 常用φ-2细胞株 （3）重组逆转录病毒感染早期胚胎 载体转染包装细胞后与8细胞胚胎共培养进行转染 （4）胚胎移植 （5）建系;（三）胚胎干细胞介导法 （ES细胞法）;关于ES细胞;原 理;关键步骤;三种转基因方法优缺点比较;优点： 1、整合率相对较高 2、可导入基因片断较长 3、外源基因整合于所有的组织细胞中的概率高 缺点： 1、整合率随机 2、有些动物原核看不清，需经特殊处理才能有效导入 3、需较精密仪器，费用昂贵;优点： 1、胚胎存活率高 2、病毒DNA随机单拷贝整合 3、宿主范围广 缺点： 1、整合率不高，整合位点是随机的 2、后代多为嵌合体动物 3、外源基因易发生重排或丢失 4、病毒载体容量不大 5、病毒DNA序列可能会干扰外源基因的表达 ;优点： 1、整合率可控 2、可用多种方法将外源基因导入ES细胞，其细胞的鉴定和筛选比较方便 3、ES细胞注入囊胚及囊胚移植到子宫，操作比较简便 缺点： 1、ES细胞系培养、保存和维持不易 2、后代多为嵌合体 3、所需时间较长 ;五、转基因关键技术;六、应用价值;1、研究基因的结构和功能及其表达与调控;2、动物疾病模型;HBV转基因动物树鼩 ;3.基因治疗（gene therapy） ;4、研制生物反应器 ;优势;;用动物乳腺表达外源基因的主要种类 产品类别 举 例 血液产品 第8因子、第9因子、C蛋白、凝血酶III、 抗胰蛋白酶、血纤蛋白原 抗体 单克隆抗体 药物 干扰素、人生长激素、tPA、EPO 疫苗 Malaria 组织维生物 Collagen 营养药 乳白蛋白、乳铁蛋白、溶菌酶、人源化牛奶 工业蛋白质 蜘蛛网蛋白、贝类分泌的黏蛋白 ;我国乳腺生物反应器研究情况 目的基因名称 产品的主要功能 承担单位 人血清白蛋白 血液溶胀剂