chap912糖的结构分析-2009.pptVIP

糖类物质结构对功能的影响 糖残基种类和排列顺序 糖苷键位置 糖残基修饰 分子量 分支度 4）酶法 ① 内切糖苷酶F（天冬酰胺-N-乙酰葡糖胺糖苷酶） ② 内切糖苷酶H（β-N-乙酰葡糖胺糖苷酶） ③ 唾液酸酶 ④ α-半乳糖苷酶 ⑤ β-N-乙酰氨基己糖糖苷酶 ⑥α-甘露糖苷酶 ⑦β-甘露糖苷酶 1-4糖苷键 1-6糖苷键 3）甲基化分析： ?羟基的全甲基化：强碱条件下（使糖基的自由羟基离子化，生成稳定的碳阴离子），与碘甲烷(或硫酸二甲酯，三甲基氯硅烷)作用，甲基化化生成甲醚。 ?甲基化产物的水解、还原、乙酰化：酸水解（90%甲酸）得到甲基化单糖，再经NaBH4还原为对碱稳定的糖醇，然后用乙酸酐在吡啶中乙酰化，得到各种部分甲基化的糖醇乙酰衍生物。 ? GC和GC-MS分析：与标准谱图归属比较，可确定单糖组分的种类、比例和糖苷键的位置。 异头碳糖苷键构型、糖基顺序无法确定。 １）红外光谱（infrared spectrograph，IR）法： 红外光谱法是一种专属性很强、应用较广（固体、液体、气体样品）的鉴别方法。 在800nm-20um连续光扫描记录下来的图谱。 原理： 由分子的振动及转动能级跃迁而引起的。 ３、异头体的测定： 异头体类型：?型糖苷键在８９０cm-1左右处有特征吸收；?型糖苷键在８４０cm-1处有特征吸收。 ? 呋喃糖和吡喃糖：呋喃糖在924±13， 879±7cm-1，吡喃糖相应在917±13， 770±14 cm-1处。 吡喃糖种类：?-D-葡萄吡喃糖特征吸收在855?833 cm-1处，?-D-葡萄吡喃糖905?876 cm-1。 磷酸基、磺酸基等取代基团信息 IR能给的糖结构信息： * * 第九章 糖的研究方法 § 9.1 糖组分分离方法 § 9.2 糖链结构分析方法 在生物体内，糖类物质主要以均一多糖（同多糖）、杂多糖、糖蛋白、蛋白聚糖和糖脂等形式存在。 生物学功能？ 糖类的存在形式 复 习 ★ 是细胞中非常重要的一类有机化合物，主要的生物学作用： ? 生物体的结构成分,如纤维素、糖胺聚糖 ? 生物体内的主要能源物质,如，糖原、淀粉 ? 其它生物分子如氨基酸、核苷酸、脂等合成的前体。 ? 作为细胞识别的信息分子、参与细胞生长与分化、免疫、 药物作用等。 思考问题： ? 功能与结构的关系？ 糖类的生物学作用 聚糖分子中单糖组成的不同，糖苷键连接方式和位置的不同以及相对分子量的不同，就显示不同的功能（或生物活性）。---研究聚糖的结构非常重要。 糖的一级和高级结构与其功能密切相关 结构是生物活性的基础，对多糖结构的研究： ① 检测疾病：恶性肿瘤、自身免疫疾病、先天遗传疾病等。 ② 促进药物方面开发利用 如，利用氨基多糖的生物活性研制有关药物，以防治某些疾病（如肝素抗血栓；硫酸软骨素近年来在临床上用硫酸软骨素治疗肾炎、急慢性肝炎、偏头痛、动脉硬化及冠心病等）。 β-D-艾杜糖醛酸 N-乙酰基-D-氨基半乳糖-6-硫酸酯 硫酸软骨质A 聚糖结构研究落后的原因： 1、结构复杂，无合成模板：A,B两个结构单位，对于蛋白质和核酸来 说，只有一种连接方式；对于两个单糖（己糖）分子而言则情况复杂得多：5种（按连接位置），10种（按照?,?分），20种（链状，环状）。糖基常连接硫酸基团、磷酸基团等。合成不象多肽有模板，可通过其cDNA测序推测结构。 2、分析技术的限制：没有能分析其极为复杂结构的方法。近年随着分析技术（NMR、MS等）的发展，推进了多糖的研究。 § 9.1 糖组分分离方法 问题：糖蛋白、蛋白聚糖等糖复合物中的聚糖组分是怎样分离纯化的？其设计原理是什么？ 本节内容：如何获得多糖组分？如何解析其结构？ 一、多糖的提取分离纯化 糖蛋白糖链的释放 酶法：有底物专一性，往往水解不完全 PNG酶F：释放N-糖链 内切酶H：从N-糖链核心的两个GlcNAc中切开，适于高甘露糖型和杂合型糖链 POG酶：释放O-糖链 外切糖苷酶 内切糖基脑酰胺酶释放糖鞘脂糖链 化学法：无专一性，但需控制反应条件 肼解法释放N-糖链 O-糖链的稀碱?-消除反应 臭氧分解法释放糖鞘脂糖链 从原料中提取多糖的一般原则 相似相溶原则： 多糖是极性大分子化合物，多易溶于水，不溶于有机溶剂。如，酸性粘多糖溶于水。大多数葡聚糖在水中溶解度小，但溶于稀碱溶液。大多植物多糖不溶于冷水。 1、常用的提取方法 ? 水提取法：沸水回流.( 丙酮先脱脂) ? 碱解提取法：糖肽键对碱不稳定。提取过程条件应该温和，避免多糖的降解。0.05-0.1mol/L NaOH,60