木瓜中齐墩果酸的提取、分离及鉴定论文.docVIP

　　木瓜中齐墩果酸的提取、分离及鉴定论文 .freel 1.1.3 试验主要试剂 95%工业酒精,分析醇的95%乙醇 甲醇 冰醋酸 高氯酸 浓硫酸 乙酸乙酯 香草醛,齐墩果酸标准品 1.2 方法 1.2.1 齐墩果酸提取方法的比较 (1)回流提取法:称取木瓜粉25g,分别用100ml,80ml,70ml的95%工业酒精在60℃下回流提取,时间依次为4,3,2小时,合并提取液,用乙醇定容至250ml,作为供试样  (2)索氏提取法:称取木瓜粉25g,用95%工业酒精在索氏提取器中提取,在90℃下至虹吸下溶液近无色(约8小时),将提取液转移至250ml容量瓶,定容至刻度作为供试样  (3)冷浸提取法:称取木瓜粉25g,用95%工业酒精150ml浸提一周,再用100ml乙醇浸提5天,合并浸提液,将提取液转移至250ml容量瓶,定容至刻度作为供试样 1.2.2 比色法测定齐墩果酸的含量 精密称取香草醛0.3g,用移液管加入6ml冰醋酸,配置成5%香草醛-冰醋酸溶液 分别取回流法,索氏提取法和冷浸法提取的样品0.01ml(每种做3个平行)加入试管中,加热挥发溶剂,试剂空白为对照 精密加入新制的香草醛-冰醋酸0.2ml和高氯酸0.8ml,在70℃恒温水浴加热15分钟 流水冷却至室温,精密加入乙酸乙酯4ml,摇匀,在波长560nm处测定吸光值,比较三种方法提取率 1.2.3 回流提取的单因素实验 (1) 温度对提取率的影响:分别称取10g木瓜粉,以95%工业酒精,料液比为1:15,按40,50,60,70,80℃五个温度梯度提取9h,提取3次,合并提取液,定容至250ml 分别取0.01ml提取液加入试管中,通过比色法测定齐墩果酸的含量(每个样品3个平行)  (2)时间对提取率的影响:分别称取10g木瓜粉,以95%工业酒精,料液比为1:15,按3h,5h,7h,9h,11h五个时间梯度,置于60℃水浴锅,提取3次,时间间隔分别为1.5,1,0.5h;2.5,1.5,1h;3,2.5,1.5h;4,3,2h;4.5,3.5,3h 合并提取液,定容至250ml 分别取0.01ml提取液加入试管中,通过比色法测定齐墩果酸的含量(每个样品3个平行)  (3)料液比对提取率的影响:按料液比为1:5,1:10,1:15,1:20,1:25,以95%工业酒精,置于60℃水浴锅中9h,提取3次,每次的溶剂用量为25,15,10ml;50,30,20ml;70,50,30ml;90,70,40ml;100,80,70ml 合并提取液,定容至250ml 分别取0.01ml提取液加入试管中,通过比色法测定齐墩果酸的含量(每个样品3个平行) 1.2.4 正交试验优化回流提取的工艺 在单因素实验基础上,考察温度(A),提取时间(B),料液比(C)3个因素,每个因素3个水平,进行正交实验 因素-水平表见表1-1所示 1.2.5 齐墩果酸的分离纯化 (1)酸碱沉降法:准确称取4gNaOH固体,加入100ml水,配成1mol/ml的NaOH溶液 量取10ml浓硫酸,将其缓慢倒入90ml水中,配成10%硫酸溶液 取一份回流供试样将其旋转真空浓缩,浓缩成浸膏状物,回收乙醇,浸膏状物质用1mol/lNaOH溶液煮40分钟,趁热过滤,重复3次,合并滤液 用10%硫酸溶液调pH=1,沸水浴4小时,氯仿萃取 蒸馏回收氯仿,得固体齐墩果酸用甲醇定容至100ml  (2)氯仿萃取法:取一份回流供试样将其旋转蒸发,浓缩成浸膏状物,回收乙醇,所得浸膏状物质先后用水和氯仿洗涤,合并洗涤液,去水层,有机层用水洗涤6次,去水层,蒸馏氯仿,所得齐墩果酸用甲醇定容至100ml 1.2.6 齐墩果酸的HPLC鉴定 (1)色谱条件:色谱柱为ODSC18色谱柱,柱温25℃,流速1ml/min,紫外检测波长215nm,流动相为甲醇:水:乙酸=90:10:0.1  (2)标准溶液的配制:准确称取10mg的齐墩果酸标准品,加甲醇溶解,置于10ml带刻度的试管中,配成1mg/ml的对照品溶液  (3)标准曲线的制作:用取样枪准确吸取0.1ml,0.2ml,0.3ml,0.4ml,0.5ml对照品溶液,加甲醇补充至10ml,混合均匀,得到浓度为0.01mg/ml, 0.02mg/ml, 0.03mg/ml, 0.04mg/ml, 0.05mg/ml的齐墩果酸标准溶液 每次取20μl进样,测定其峰面积 以齐墩果酸浓度(x)和峰面积(y)求回归方程  (4)精密度测定:取上述对照品20μl,重复5次进样,测定各自峰面积  (5) 重复性实验:取同一样品平行制备5份供试品溶液,在上述同样色