枸杞基因组DNA提取及指纹图谱分析论文.docVIP

　　枸杞基因组DNA提取及指纹图谱分析论文 严奉坤，许兴， 魏玉清， 雍立华，郑国保 【关键词】 枸杞；,,基因组DNA；,,RAPD；,,指纹图谱 摘要：目的建立一种适于RAPD分析的快速提取枸杞叶片基因组DNA的方法，并利用RAPD技术研究枸杞属植物基因组DNA指纹图谱。 方法采用改进的CTAB法提取枸杞冷藏幼叶的基因组DNA，利用RAPD技术对其进行指纹图谱分析。 结果改进的CTAB法提取的10份枸杞材料基因组DNA均适于RAPD分析；可提供清晰的RAPD指纹图谱，利用筛选出的2个随机引物对供试材料DNA进行随机扩增.freelic DNA from Lycium bararum and Its Fingerprint Analysis Abstract：ObjectiveTo develop valid method to extract DNA from Lycium bararum for RAPD analysis and research its DNA fingerprint by using RAPD technology. MethodsThe extracts of high quality genomic DNA the frozen leaves of Lycium bararum by modified CTAB method and its fingerprint ic DNA could be got by RAPD. Ters amplification. A total of 56 DNA bands ong orphic, the average rate of polymorphic bands odified CTAB method entation in cesium chloride gradient or column chromatography.The RAPD markers can be used for the studies of fingerprint of Lycium bararum sensitively. Key bararum; Genomic DNA； RAPD； Fingerprint RAPD由 Peltier Thermal Cycler，M J Research，Inc，USA）；电泳仪（DYY10C型；北京六一仪器厂）；电泳槽（DYCp31型；北京六一仪器厂）；SmartSpecTM 3000核酸蛋白测定仪（BIORAD Lab，Inc，USA）；Eppendorf 5415D离心机；UVP GDS8000凝胶成像系统。Buffer，Taq DNA 聚合酶，dNTPs，MgCl2，300bpDNA ladder购自北京天为时代公司，10碱基随机引物购自上海生工生物工程有限公司，Agarose（Promega公司），EB（瑞士Fluka Chemika公司）。 1.3 方法 1.3.1 基因组DNA提取采用CTAB法［12～15］，并适当改进。具体步骤为：①枸杞幼叶在液氮中研磨至无可见组织块后装入1.5 ml的Eppendorf管中（大约1/3体积），加入500 μl提取缓冲液〔含100 mmol/LTrisHCl（pH 8.0），20 mmol/L EDTA,.freelol/L NaCl，2%CTAB，0.2%β巯基乙醇〕，混匀，65℃温育30 min，取出立即放入冰中冷冻10 min。②加入500 μl的氯仿异戊醇（24∶1），混匀，于4℃冰箱中冷冻10 min，12 000 r/min离心10 min，转移上清液于干净的1.5 ml的Eppendorf管中，重复1次。③加入300～500 μl的异丙醇或1ml的无水乙醇混合，于-20℃下静置20 min。12 000 r/min离心15 min，弃上清液，先加入70%乙醇洗沉淀两次去除有机溶剂、无机盐等，然后加入无水乙醇脱水，室温干燥。④将干燥DNA溶解于200 μl的ddH2O或TE缓冲液（含10 mmol/L TrisHCl，1 mmol/L EDTA，pH8.3）做母液于-20℃储存。将DNA母液取出10 μl稀释40倍后，用SmartSpecTM3000核酸蛋白测定仪测波长260，280及320 nm处光吸收，直接从仪器主屏上读出被测样品A260，A280，A260/A280和DNA含量。点6×上样缓冲液10 μl于玻璃板上，分别吸取各材料DNA母液2 μl与其混匀，然后在0.8%琼脂糖凝胶上电泳（72 v电压下电泳30 min），检验DNA片段大小。最后将DNA母液稀释为20 ng/μl的工作液分装成小包装于-20℃储存或4℃保存备用。 1.3.2