比色法测定甘草中总皂苷的含量论文.docVIP

　　比色法测定甘草中总皂苷的含量论文 【摘要】 目的建立甘草中甘草总皂苷含量的测定方法。方法用香草醛高氯酸试剂，在589 nm处有最大吸收，并对比色条件进行了优化。结果该法精密度高，1 h内稳定，平均加样回收率为99.03%。结论 此法简便、准确、稳定性、重复性好，可用于甘草总皂苷的测定。 【关键词】 甘草；总皂苷；香草醛高氯酸 Determination of Total Saponins in Glycyrrhiza by Colorimetry Abstract：ObjectiveTo establish the method of determination of total saponins in Glycyrrhiza. MethodsUse VanillinHClO4 as the chromogenic reagent and detect the maximum absorption at the . Choose the best chromogenic preparation to determine the contents of the samples. ResultsThe precision of the method is high. The color of the treated samples ethod is simple, accurate, highly sensitive and reproducible. It may be used for the quantitative determination of total saponins in Glycyrrhiza. Key inosae）甘草属（Glycyrrhiza）植物，为我国重要的传统中草药。甘草属植物在世界上共有30余种，我国有8种.freelg溶解于甲醇中定容至10 ml，浓度为1 mg·ml-1，甘草（购于黑龙江省大庆市大同区）。 2 方法 2.1 最大波长的确定准确吸取0.5 ml标准品溶液，置于10 ml具塞试管中，70℃水浴挥干溶剂，加入0.2 ml的5%香草醛－冰醋酸溶液，再加入0.8 ml的高氯酸，摇匀，于55℃水浴中加热20 min，立即取出用流水冷却至室温，加入冰醋酸5 ml稀释，摇匀，以不加标准品的样品管为空白，于400～700 nm波长处进行扫描。 2.2 比色条件的优化 2.2.1 最佳显色时间的确定取5份0.2 ml对照品溶液，分别置具塞试管中，70℃水浴挥干溶剂，各加入0.2 ml的5%香草醛－冰醋酸溶液，再加入0.8 ml的高氯酸，摇匀，于60℃水浴中加热不同时间（5，10，15，20，25 min），立即取出用冷水冷却至室温，加入冰醋酸5ml，摇匀，于最大吸收波长处测定其吸收值。 2.2.2 最佳显色温度的确定分别取5份0.2 ml对照品溶液，依上法操作，在不同温度（50，55，60，65，70℃）水浴20 min，同上进行测定。 2.3 显色稳定性的考察精确吸取标准样溶液0.2 ml，按2.1中的香草醛－高氯酸法显色，在1 h内，每隔5 min测定吸收值的变化情况。 2.4 标准曲线绘制精确吸取标准液0.1，0.15，0.2，0.25，0.3 ml分别置于10 ml具塞试管中，按2.1中的香草醛－高氯酸法显色后测定吸光值，每个浓度平行测定3次，以皂苷的质量为横坐标，吸光度为纵坐标作图得到回归方程。 2.5 样品待测液的制备准确称取脱脂后的甘草粉0.2 g（40目）于10 ml具塞试管中，准确加入甲醇4 ml(含1%氨水)，加塞后放入超声波清洗器中超声1 h，然后取出试管置于离心机中以3 000 r·min-1离心15 min，上清液作为待测液。 2.6 精密度的测定准确吸取待测液60 μl共6份，按2.1中的香草醛－高氯酸法显色后测定吸收值。 2.7 加标回收率实验准确量取6份已知浓度的供试样品25μl，再分别加入标准溶液30 μl，按2.1中的香草醛－高氯酸法显色后测定吸收值，计算加标回收率。 2.8 样品的测定吸取上述2.5项下提取纯化的3种样品溶液各60 μl，按2.1中的香草醛－高氯酸法显色后测定吸收值，根据工作曲线计算皂苷含量。 3 结果与讨论 3.1 最大波长的确定香草醛－高氯酸是常用的一类显色剂，显色灵敏度高，试剂空白溶液色浅，常用作三萜皂苷的显色剂。其反应机理可能是皂苷在强氧化性酸的作用下脱氢，氧化后再与香草醛加成。显色后，香草醛－高氯酸能与皂苷反应形成特征的紫红色。扫描结果表明，甘草酸单铵盐标准品溶液在589 nm处有最大吸收，故选取589 nm为测定波长。 3.2 比色条件的确定 3.2.1 最佳显色时间的确定结果见图1