核酸大实验上课.pptVIP

核酸大实验 ----生化三组 实验一.动物肝细胞内DNA和RNA的提取和分离 实验二. 地衣酚法测定RNA含量 实验三.二苯胺法测量肝组织中DNA的含量 实验一.动物肝细胞内DNA和RNA 的提取和分离 实验目的：初步掌握从组织中分离和提纯DNA与 RNA的原理和方法。 实验原理： 核酸的常用方法是STS法：首先使细胞破碎，使核酸处于易提取的状态。其次除去组织中存在的酸溶性物质，脂类及蛋白质等物质，因为它们可干扰RNA和DNA的测定。然后根据碱水解RNA而不水解DNA的特性，可将RNA水解产物与DNA分开，再分别测定RNA和DNA的含量。 仪器： 研钵、剪刀、各式试管、离心管； 离心机、三用恒温水浴箱，手术器械。 试剂： 柠檬酸钠、20%三氯醋酸（TCA）、10%TCA、无水乙醇、氯仿-甲醇（体积比2：1）混合液、乙醚、0.3N氢氧化钾、6N盐酸、0.1N盐酸、5%高氯酸溶液 仪器与试剂： 具体操作流程： 抗凝血剂 可提高RNA提取量 使蛋白质变性 沉淀蛋白质 除去残余的TCA与柠檬酸钠 均为脂质的良好溶剂 研磨好的鸡肝匀浆 加入氯仿甲醇后 沉淀在清液上方 加入氯仿甲醇后 沉淀在清液下方 蒸干乙醚后所得粉末 加入KOH后研磨成糊状 操作注意事项： 1.研磨鸡肝时先加1m