氟西汀对海马神经元生长的影响论文.docVIP

　　氟西汀对海马神经元生长的影响论文 .freela公司），37 ℃消化30 min，中间振摇1或2次，加入10%的 DMEM/F12（美国Gibco公司）5 ml，轻轻吹打15次，然后1 000 r · min-1离心5 min，制成单细胞悬液，置于CO2 培养箱（德国Heraeus公司产品）中，差速贴壁30min，去除成纤维细胞，吸取未贴壁的细胞，并用200目 的不锈钢滤网过滤，收集过滤后的单细胞悬液于培养皿中，然后至离心管中，取一滴单细胞悬液进行计数，并用DMEM/F12将细胞密度调到1×106ml-1，然后接种于200 μg·ml-1多聚赖氨酸（美国Sigma公司）包被的6孔培养板中，转移至培养箱内培养，4 h后换为 无血清培养基，即含2% B27的Neurobasl培养基（美国Gibco公司），以后每3天半量换液1次。使用培养 6 d的神经元进行染色鉴定。 1.2 大鼠海马神经元的鉴定 1.2.1 烯醇化酶（NSE）免疫细胞化学染色 取培养6 d 6孔培养板中的盖玻片进行神经元特异的NSE免 疫组织化学染色。弃去培养液，4%多聚甲醛室温固定1 h ，加入 0.3% H2O2甲醇去除内源性过氧化氢酶，0.1% TritonX-100破膜，10%绵羊血清封闭，加入一抗1∶200 兔抗鼠 NSE抗体，4 ℃湿盒过夜，0.01 mmol ·L-1PBS清洗，加入二抗1∶20