细菌个体形态的观察谢茜.ppt

模板来自于 / 模板来自于 / * * 细菌个体形态特征的观察  细菌染色的原理 1 细菌涂片的制备 2 革兰氏染色 3 细菌涂片的制备 4 主要内容  实验材料 接种环、细菌分离培养物（上次实验平板） 接种环接种针，酒精灯，生理盐水2支，镜油瓶、拭镜纸1套，吸水纸1本，载玻片4张，细菌分离培养物（上次实验平板），革兰氏染色液 * 1.1细菌染色法 ★单染色法：只用一种染料染色，能清楚观察菌体大小、形态与排列，不能鉴别细菌。 ★复染色法（鉴别染色）：采用两种以上的不同染料进行先后染色，可将细菌染成不同的颜色，以便鉴别细菌。 ※抗酸染色:用于检查结核分枝杆菌、麻风分枝杆菌等抗酸性细菌(※一些一旦用某些方法染色后，能够抵抗酸性酒精脱色的细菌)，阳性者为红色。 ※特殊染色：荚膜染色，芽胞染色，鞭毛染色，极体染色（用于白喉杆菌异染颗粒染色）。 1.1细菌染色法 结核分枝杆菌 抗酸染色 麻风分枝杆菌 抗酸染色 产气荚膜梭菌荚膜 Hiss 染色 破伤风梭菌芽胞 芽胞染色 变形杆菌 鞭毛 Leifson染色 白喉棒状杆菌 异染颗粒 Albert染色 1.2革兰氏染色法 革兰染色法是丹麦内科医生 Christain Gram于1884年创立的一种细菌复染色方法，已有130多年的历史，仍在广泛使用。 1.3革兰氏染色法的原理 结晶紫 卢戈碘液液 酒精 复红 G-菌： 类脂质多 肽聚糖少 G+菌： 肽聚糖多交联度大 类脂质少 通透性学说、等电学说、化学学说 1.3革兰氏染色的意义 鉴别细菌：把细菌分成G+和G-两大类。 选择抗菌药物：例如G+球菌对青霉素敏感,G-杆菌耐药。 了解细菌的致病机理：G+菌大多产生外毒素,G-菌产生内毒素。 革兰染色的步骤 涂片 → 干燥 → 固定→ 染色 2 涂片的制备 无菌操作 灭菌接种环 2 涂片的制备 ↑ 细菌合适 ↑ 细菌较多 ①接种环取盐水3ul×2滴,水滴间距小于2cm。 ②取菌苔少许（1mm小菌落半个）与盐水混匀，涂成大于1cm2均匀涂膜。 ③涂毕→环移至涂膜中 央侧立，待环内菌膜破裂，接种环烧灼灭菌。 无菌操作 2 涂片的制备 固定 Fixation 涂片smear 干燥dry ①手持载玻片一端，涂膜朝上，两个涂膜快速通过火焰外层3次，时间2～3秒钟。 ②促使菌体蛋白质凝固，固定在载玻片上，以免染色水洗的时候，细菌被水洗掉。 初染：结晶紫染液染 1min 水洗，甩干 媒染：卢戈氏碘液染1min 水洗，甩干 脱色： 酒精脱色约30s 水洗，甩干 复染： 复红染液染30s 水洗，甩干 印干 油镜观检 染色 关键步骤！ 3 革兰氏染色的方法和步骤 A.油镜放入光路之前，一定要在标本的观察部位上加一滴浸油。 B.旋转物镜转盘，使油镜进入光路，用微调旋钮对好焦距。 C.如果浸油内有气泡，会影响观察，可稍微旋转物镜转盘，使油镜来回通过1～2次浸油，排除油内气泡。 4 100倍油镜的使用 自行操作 琼脂平板分离的浓汁标本 EMB平板分离的粪便标本 白 金黄 粉红 紫黑 实验结果 用普通平板，从浓汁标本中分离得到金黄、白色两种菌落，经革兰氏染色后，显微镜油镜下均为紫色的球状，排列不规则，呈葡萄串状，是典型的G+葡萄球菌。 葡萄球菌(电镜) 金黄、白色形态与染色(油镜) 酸葡萄 金黄、白色菌落特征 黄色 白色 用伊红美蓝平板,从粪便标本分离、获得紫黑色和粉红色半透明两种菌落。革兰氏染色后，在显微镜下，均为红色的杆菌，散在排列， 为典型的G- 的杆菌。 杆菌(电镜) 紫黑、粉红细菌的形态与染色(油镜) 紫黑 紫黑、粉红菌落特征 粉红 实验结果 生物安全警告 BIOHAZARD 本次实验操作，可产生几十至几百个微生物气溶胶颗粒。 气溶胶粒径＞100um沉降很快,＜50um在0.4s内扩散开,＜5um通过呼吸道直接到达肺泡。 Pike博士对实验室感染统计分析结果发现，不明原因的感染高达82%，大多数是气溶胶在空气中扩散引起的。 实验时应坐稳，很专注，不分心，在火焰周围10～20厘米内操作，保持安静、有序，尽量少说话，以免感染病原菌。 1、细