HIV检测技术的.ppt

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HIV检测技术的

HIV检测技术;艾滋病实验诊断技术;急性期; HIV抗体检测的目的和要点;;初筛实验室设备条件;艾滋病检测方法的意义;抗体检测;酶联免疫试验 ( ELISA );筛查试验;第一代ELISA试剂;第二代ELISA试剂;第三代ELISA试剂;第四代ELISA试剂; HIV抗体试剂盒进展;Closing the window;筛查样品;唾液检测试剂;优点: 1. 样品稳定,各种温度下稳定性大于三周 2. 敏感性和特异性与标准的血清学实验相当 缺点: 1. 预处理复杂,重复性较差 2. 会出现不同于血清抗体的种类和滴度 ; 尿液检测试剂;筛查方法;酶联; 间 接 ELISA 方 法 Ag+Ab+Ab-E;双 抗 原 夹 心 法 Ag+Ab+Ag-E;双 抗 原 夹 心 法 Ag+Ab+Ag-E; 竟 争 ELISA 法 Ag+Ab+Ab-E; 抗原捕获法 将抗HIV-McAb包被固相板中 加入HIV特异性Ag 待检血清标本 酶标-Ab/(E标抗人-IgG) 底物显色 ;抗体捕获法(特异抗体捕获) 抗人-IgG 包被固相载体 待检血清标本(总IgG) E标记HIV-Ag 底 物 特点:提高敏感性\特异性;试剂的平衡;加样及试剂;;温度和时间;;洗涤;;;显色;;比色;读数;酶联实验的影响因素;;;ELISA试验中可能出现的问题及原因分析;;化学发光或免疫荧光试验;快速检测(RT)及其它检测试验;;凝集实验;前滞现象: 反应中抗体含量过多,影响抗原抗体的理想结合,大量抗体结合于抗原阻碍了交叉联结符合体的形成,使肉眼观察不到凝集现象,造成假阴性。 解决办法:稀释样品;凝集试验注意事项;HIV抗体检测(明胶颗粒凝集试验);HIV抗体检测(明胶颗粒凝集试验);;;ELISA试剂(13种) 丽珠、生物梅里埃、万泰、MUREX、绿科、永华、金豪、科华、新创、普生、中山、华美、吉比爱 快速试剂(7种) 科华、新创、PA、雅培、EY、艾康、万泰 ;抗体初筛试验的局限性;HIV抗体初筛检测结果解释; 确认试验的试剂 必须是经国家食品药品监督管理局注册批准、在有效期内的试剂。 确认试验方法 包括免疫印迹试验(WB)、条带免疫试验(LIATEK HIVⅢ)、放射免疫沉淀试验(RIPA)及免疫荧光试验(IFA)。 国内常用的确认试验方法是WB。; 确认检测流程 先用HIV-1/2混合型试剂进行检测,如果呈阴性反应,则报告HIV抗体阴性;如果呈阳性反应,则报告HIV-1抗体阳性;如果不满足阳性标准,则判为HIV抗体检测结果不确定。 如果出现HIV-2型的特异性指示条带,需用HIV-2型免疫印迹试剂再做HIV-2的抗体确认试验,呈阴性反应,报告HIV-2抗体阴性;呈阳性反应则报告HIV-2抗体血清学阳性,并将样品送国家参比实验室进行核酸序列分析。;艾滋病实验室诊断确认试验(蛋白印迹Western-Blot);WB原理; 确认试验结果的判定 下面是我国使用WB确认HIV感染的判定标准和判定结果的基本原则。在实际工作中还应参照所用试剂盒说明书综合判定,遇疑难情况应报上级实验室解决。 HIV-1抗体阳性(+) 至少有2条env带(gp41和gp160/gp120)出现,或至少1条env带和p24带同时出现。 HIV-2抗体阳性(+) 同时符合以下2条标准可判为HIV-2抗体血清学阳性: (1)符合WHO阳性判定标准,即出现至少2条env带(gp36和gp140/ gp105)。 (2)符合试剂盒提供的阳性判定标准。 HIV抗体阴性(-) 无HIV抗体特异带出现。 HIV抗体不确定(±) 出现HIV抗体特异带,但不足以判定阳性。 ?;HIV抗体WB实验的阳性判断标准;WB结果解释;HIV不确定结果的分析;窗口期; 窗口期的决定因素 ;

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