现代生化技术实验.doc (81.5 kb).docVIP

现代生化技术实验 生物工程教研室编 二零零五年二月 实验一 蛋白质的性质（一）蛋白质及氨基酸的呈色反应 目的： 1、了解构成蛋白质的基本结构单位及主要连接方式 2、了解蛋白质和某些氨基酸的呈色反应原理 3、学习几种常用的鉴定蛋白质和氨基酸的方法 二、呈色反应 （一）双缩脲反应： 1、原理：尿素加热至180℃左右，生成双缩脲并放出一分子氨。双缩脲在碱性环境下能与Cu2+结合生成紫红色化合物，此反应称为双缩脲反应。蛋白质分子中有肽键，其结构与双缩脲相似，也能发生此反应（一切蛋白质或二肽以上的多肽都有双缩脲反应，但有双缩脲反应的物质不一定都是蛋白质或多肽）。可用于蛋白质的定性或定量测定。 2、材料与试剂：尿素 10g；10％的氢氧化钠溶液 250ml；1％硫酸铜溶液 60ml；2％卵清蛋白溶液（或鸡蛋清溶液蛋清：水＝1:9） 3、操作： （1）取少量尿素结晶，放在干燥试管中。用微火加热使尿素溶化。溶化的尿素开始硬化时，停止加热，尿素放出氨，形成双缩脲。 （2）冷却后，加10％氢氧化钠溶液约1ml，振荡混匀，再加1％硫酸铜溶液1滴。观察颜色的变化。（注意避免硫酸铜过量） （3）向另一试管加卵清蛋白溶液约1ml和10％氢氧化钠溶液约2ml,摇匀，再加1滴1％硫酸铜溶液2滴，随加随摇。观察颜色的变化。 （二）茚三酮反应