常用生物化学仪器及色谱仪器介绍.ppt

气相色谱法（GC）是英国生物化学家Martin等人在研究液液分配色谱的基础上，于1952年创立的一种极有效的分离方法，它可分析和分离复杂的多组分混合物。目前由于使用了高效能的色谱柱，高灵敏度的检测器及微处理机，使得气相色谱法成为一种分析速度快、灵敏度高、应用范围广的分析方法。 以气体作为流动相的色谱分离方法。适用于沸点较低、热稳定性好的中小分子化合物的分析。 气相色谱分离原理 气相色谱(GC)是基于时间差别的分离技术。 将气化的混合物或气体通过含有某种物质的管，基于管中物质对不同化合物的保留性能不同而得到分离。样品经过检测器以后，被记录的就是色谱图，每一个峰代表最初混合样品中不同的组分。峰出现的时间称为保留时间，可以用来对每个组分进行定性；峰的大小（峰高或峰面积）则是组分含量大小的度量。 气相色谱系统主要包括四部分: 载气系统 进样系统 分离系统 检测系统 这个系统是指样品经色谱柱分离后，各成分按保留时间不同，顺序地随载气进人检测器，检测器把进入的组分按时间及其浓度或质量的变化，转化成易于测量的电信号，经过必要的放大传递给记录仪或计算机，最后得到该混合样品的色谱流出曲线及定性和定量信息。 液相色谱系统主要包括四部分: 高压输液系统 进样系统 分离系统 检测系统 由于高效液相色谱所用固定相颗粒极细，因此对流动相阻力很大，为使流动相较快流动，必须配备有高压输液系统。它是高效液相色谱仪最重要的部件，一般由储液罐、高压输液泵、过滤器、压力脉动阻力器等组成，其中高压输液泵是核心部件。 关键技术－六通阀进样系统 三、分离系统 分离系统的主要元件是色谱柱，它包括柱管与固定相两部分。柱管材料有玻璃、不锈钢、铝、铜及内衬光滑聚合材料的其他金属。玻璃管耐压有限，故金属管用得较多。一般色谱柱长5～30cm，内径为4～5mm，凝胶色谱柱内径3～12mm，制备柱内径较大，可达25mm以上。 四、检测系统 紫外检测器（包括二极管阵列检测器） 荧光检测器 示差折光检测器 电导检测器 蒸发光散射检测器 原理：基于被分析组分对特定波长紫外光（最大吸光度）的选择性吸收 定量基础：比耳定律，A＝KCL 优点： 1）灵敏度高 2）对温度和流速不敏感 3）可用于梯度洗脱 缺点：仅适用于测定有紫外吸收的物质 荧光检测器 示差折光检测器 原理：连续测定流通池中溶液折射率来测定试样中各组分浓度。 优点：通用型检测器 缺点： 1）属于中等灵敏度的检测器 2）对温度变化敏感（配柱温箱） 3）对溶剂组成变化敏感，不能用于梯度洗脱 电导检测器 原理：根据物质在某些介质中电离后所产生的电导变化来测定电离物质含量。广泛应用于离子色谱法。 优点：对流动相流速和压力的改变不敏感，可用于梯度洗脱。 缺点：对温度变化敏感（每升高1度，电导率增加2%-2.5%)。 主要用于离子色谱检测水溶性无机和有机离子。 蒸发光散射检测器 高效液相色谱法与气相色谱法的比较 高效液相色谱法与气相色谱法的比较 高效液相色谱法与气相色谱法的比较 离心机概述 离心机是利用离心力对混合液（含有固形物）进行分离和沉淀的一种专用仪器，是分离、纯化细胞、病毒、蛋白、核酸和酶的最方便最有效的工具。 一、转子 二、转子速度的设定 三、样品的装载和平衡 三、样品的装载和平衡 离心机使用注意事项 离心机使用注意事项 离心机使用注意事项 公共平台离心机简介 公共平台离心机简介 公共平台离心机简介 公共平台离心机简介 公共平台离心机简介 公共平台离心机简介 超声波细胞破碎仪 原理：将电能通过换能器转换为声能，这种能量通过液体介质而变成一个个密集的小气泡，这些小气泡迅速炸裂，产生的象小炸弹一样的能量，从而起到破碎细胞等物质的作用。 用途：用于各种组织、病毒、细菌、孢子及其他细胞结构的破碎，也可用于各类无机物质的破碎重组，同时可用来乳化、分离、匀化、提取、消泡清洗及加速化学反应等。 超声波细胞破碎仪 使用注意事项 使用注意事项 使用注意事项 使用注意事项 超声波破碎时，由于空化效应会使温度很快上升，建议采用短时间（每次不超过5 秒）多次破碎，同时可外加冰浴冷却。 如果产生气泡，蛋白就会变性失活，最好避免气泡产生。 1、要调整好探头深入液面的位置。一般把探头深入到液面以下1/3的位置。 2、适当缩短破碎时间，延长间歇时间。如果超声时间太长很难散热，导致蛋白变性产生气泡。最好停顿时间长一些。 气相色谱法分析对象只限于分析气体和沸点较低的化合物或挥发性的衍生物，它们仅占有机物总数的20％。 对于占有机物总数近80％的那些高沸点、热稳定性差、摩尔质量大的物质，目前主要采用高效液相色