微生物常用培养基配制方法.doc

常用基础培养基 营养琼脂 【用途】供作一般细菌培养和菌株的纯化及传种用 【原理】培养基含有氮源、碳源和微量无机盐适合一般细菌的生长繁殖 【成分】蛋白胨１０牛肉膏５.０氯化钠５.０琼脂粉２０蒸馏水１ＬpＨ７.2～7.4 【制备】将上述成分(除琼脂外)溶于水中校正pH后假如琼脂,煮沸溶解,根据用途不同进行分装,经121灭菌15min,倾注平板或制成斜面,置冰箱保存,两周内保持用完 【接种】根据用途不同按常规操作,3518～24h观察结果 【观察结果】在平板上除可以观察菌落的形态外，还可以判断溶血的情况：菌落周围的培养基内红细胞完全破坏为?溶血，菌落周围呈绿色为a溶血。溶血的情况可以显微镜下用低 【质量控制】金黄色葡萄球菌,菌落浅黄色,直径＞1.5mm志贺痢疾菌,菌落无色,直径＞1.5mm铜绿假单胞菌,菌落无色或浅绿色,直径＞2.5mm 血琼脂培养基 【用途】适用于各类需氧及兼性厌氧细菌生长，一般细菌学检验标本的分离培养、溶血鉴别及菌种保存 【原理】羊血或兔血时细菌生长繁殖的良好营养物质。在45～50的基础培养基中加加入血液（5～10%）可以保存血液中某些不耐热的生长因子，同时血细胞不被破坏。若将NaCl的浓度提高到0.85%,则可使血平皿经3518～24h后色泽仍然鲜艳。在血平板上除可以观察菌落的形态外，还可以判断溶血的情况：菌落周围的培养基内红细胞完全破坏为?溶血。菌落周围呈绿色为ɑ溶血。溶血的情况可以显微镜下用低倍镜观察 【成分】牛肉浸出液1L蛋白胨10氯化钠5琼脂15无菌脱纤维羊血60ml pＨ７.2～7.4 【制备】将前四项成分混合，加热溶化，校对pH，置三角瓶内，高压灭菌（12115min）后冷至约50 ，加入无菌纤维羊血，旋转式充分摇匀后倾平板。血琼脂层厚4mm。凝固后，抽样置于35培养18～24h，如无菌生长，冷藏备用。 【接种】取标本增菌培养物或纯培养物划线接种到平板上，置35培养1～2d，观察结果 【观察结果】在血平板上除可以观察菌落的形态外，还可以判断溶血的情况：菌落周围的培养基内红细胞完全被破坏为?溶血，菌落周围呈绿色为ɑ 【质量控制】化脓性链球菌，ATCC19615，生长良好，?-溶血。肺炎链球菌，ATCC6303，为ɑ溶血。表皮葡萄球菌，ATCC12228，生长良好，不溶血。 巧克力培养基 【用途】主要用于嗜血杆菌的分离，亦可用于奈瑟菌的增菌培养。 【原理】流感嗜血杆菌培养时，需要依赖血液中的X及V因子方能生长繁殖，当培养基加热至80～90时，可使血液中的红细胞破裂，以利于嗜血杆菌，奈瑟菌等的生长培养。凡疑有这些菌种存在的标本，均应接种巧克力平板。血液标本培养，增菌后又细菌生长，若移种巧克力平板上，有利于分离更多的细菌。 【成分】牛肉浸出液1L蛋白胨10氯化钠5琼脂15无菌脱纤维马血、羊血或兔血100mlpH７.2～7.4 【制备】将前四项成分混合，加热溶化，校对pH，高压灭菌（12115min）后在80～90以无菌方法加入血液，摇匀后置90水浴中。维持该温度15min，使之呈巧克力色取出，至室温冷至约50，倾制平板 。凝固后，抽样置于35培养18～24h，如无细菌生长，冷藏备用。 【接种】将可疑标本直接划线接种于该培养基上，置35普通培养或置含5%～10%二氧化碳环境培养18～24h，取出观察细菌生长状况。 【观察结果】流感嗜血杆菌菌落微小(0.8mm),无色透明、光滑整齐、似露滴状，48h后达1.5mm，从血液或脑脊液中分离的菌落往往形成液状，菌落较大，老培养物菌落中心呈凹陷。 【质量控制】流感嗜血杆菌ATCC10211，生长良好，菌落典型。肺炎链球菌，ATCC6305，生长良好，菌落典型。 【保存】置冰箱，1周内用完。 营养肉汤 【用途】用于一般细菌的增加培养，加入1%的琼脂粉亦可作营养琼脂。 【原理】该培养基含有氮及微量无机盐，适宜一般细菌的生长繁殖，因此是最基础的培养基。 【成分】牛肉浸液1L蛋白胨10氯化钠5pH7.2～7.4（牛肉浸液可用3.0g牛肉膏和1L蒸馏水代替） 【制备】上述各成分混合溶解，校正pH。分装试管，每管3～5ml。高压灭菌（12115min），做无菌试验后冷藏备用。 【质量控制】金黄色葡萄球菌、伤寒沙门菌、化脓性链球菌均生长良好。 肉浸液培养基 【用途】供作基础培养用。营养比肉膏汤好，一般营养要求不高的细菌均可生长。 【原理】牛肉含有丰富的营养物质，如蛋白质、碳水化合物及无机盐类等，通过水解并用Nacl 【成分】新鲜牛肉500蛋白胨10氯化钠5蒸馏水1LpH7.4～7.6 【制备】1.将新鲜牛肉去除脂肪、肌膜及肌腱，切成小块后用绞肉机绞碎(或用刀剁碎)。取500g碎肉，加蒸馏水1L，混合后置冰箱中冷浸过夜。 2.将肉浸液取出，煮沸20～30min（并不断搅拌，以免沉底、烧