毛细管电色谱的方法原理与应用.ppt

加压毛细管电色谱仪的原理及应用 Capillary ElectrochromatographyAdvances and Applications CEC基本原理 1微型分离技术 2micro-HPLC 和 CE的结合 3电渗流 (EOF) 为流动向的推动力 4二维分离机理：液相色谱和电泳之和（分配和电泳淌度） 历史回顾和研究现状 一、毛细管电色谱发展进程 1952年Mould 和Synge[2]首次在色谱分析上使用了电渗流，他们在薄层色谱上利用电场分离了胶棉中的多糖化合物。 1974年Pretorius[3]才首次成功地实现了在填充毛细管液相色谱中用电渗流取代泵，并获得了比传统液相色谱高的柱效能，但是由于Pretorius当时所用的柱子管径较大 ，因此CEC的优越性没有得到充分展示，所以在70年代后期 ，此法没有得到充分重视。 直到1980年Otsuka[4]才又发表了一篇有关CEC的文章。 1981年Jorgenson等[5]用CEC分离了两种毛细管区带电泳难以分离的电中性芳香化合物后，逐渐引起人们的重视，关于CEC的文章陆续得到了报道。 1987年特别是在Knox[6,7]从理论上阐述了CEC高效性的特点以后，毛细管电色谱才真正的得到了飞速发展并成为一个新的研究方向。 历史回顾和研究现状 二、毛细管电色谱基本原理 CEC与HPLC原理的比较 CEC：是采用具有塞状流型的电渗流推动流动相，其线速度是与柱的直径和填料颗粒大小无关的。因而在毛细管中几乎没有流速梯度，谱带展宽效应很小。 HPLC：是采用压力驱动流动相，流速随填料颗粒大小和柱长而变化，流速在管中呈抛物线状轮廓，因而造成谱带展宽和柱效的降低。 历史回顾和研究现状 二、毛细管电色谱基本原理 CEC的保留机理[8,9] 如同HPLC：基于溶质在固定相和流动相间相互作用的不同。 如同CZE：基于溶质电泳淌度的不同。 K＝K’＋k’(μep/μeof)+(μep/μeof)－－－－（1） K—是CEC的容量因子 K’—是在CEC中单纯色谱因素引起的容量因子 μep－为溶质的电泳淌度 μeof －为流动相的电渗淌度 讨论： （1）对于中性化合物，μep 为零，K’等于K－－反应纯粹的色谱过程 （2）对于不保留的带电化合物，K’为零－－反应纯粹的电泳过程 （3）对于有保留的带电化合物，色谱和电泳机理同时起作用，因此CEC既能分离电中性物质，又能分离带电物质。 历史回顾和研究现状 三、毛细管电色谱的操作模式 用电渗流驱动的电色谱 由于仪器结构简单，应用面比较广。 用电渗流和泵双重驱动的电色谱 优点：避免在分离过程中气泡的产生，同时可以用泵来控制 流速，缩短分离时间。 历史回顾和研究现状 四、毛细管电色谱研究热点和难点 热点： 电色谱理论的研究和完善 柱制备技术的研发 填充式、 开管式和整体柱式 应用领域的拓宽 环境领域、 医药和生化领域手性拆分 难点： 柱制备技术 焦耳热效应 塞子效应 气泡问题 TriSepTM-2100加压毛细管电色谱仪操作流程 准备工作： 样品：过滤（0.45或0.22μm滤膜） 流动相：过滤（0.45或0.22μm滤膜），脱气, (注意：超声脱气时，水太热了要换) 仪器 主要包括四个模块：流体输送单元（Solvent Delivery Module）；微流控制单元（Micro Flow Control Module）；高压电源（High Voltage Module）；检测器（Detection Module）和数据采集软件。各部分分别开关、设置工作参数和程序。 使用温度10-35℃，相对湿度不大于75%。 可以进行毛细管微柱色谱、毛细管电色谱、加压毛细管电色谱、毛细管电泳分析。 各单元参数设置及操作 1．溶剂输送单元 1．1 参数设置：反复按 FUNC/BACK 键至显示所要设置的参数，按数字键输入后，ENTER 确认；设置下一参数，主要参数设置完成，按CE 回到初始画面。常用参数包括流速FLOW（正常流速为0.02-0.05mL/min, 如果在这个流速范围内进样量太大，就增加流速；反之就减小流速）、最高、最低限压P.MAX/P.MIN等（最低限压建议设置大于0的数值，否则漏夜、进气保护功能不能发挥作用） 1．2 输液方式 1．2．1 单泵恒比例送液：使用两个溶剂输送单元中的一个，按比例配好流动相并超声脱气，设置流速，按PUMP开始输液 1．2．2 双泵恒比例送液：一种方式是分别在两个溶剂输送单元上分别设置流速，输送需要混合的A、B两种溶剂；另一种方法是设置主泵和