第三章液相色谱.ppt

高效液相色谱 (High Performance Liquid Chromatography )(HPLC) 液相色谱仪 HPLC的产生 液相色谱法开始阶段是用大直径的玻璃管柱在室温和常压下用液位差输送流动相，称为经典液相色谱法，此方法柱效低、时间长(常有几个小时)。 高效液相色谱法(High performance Liquid Chromatography，HPLC)是于60年代后期引入气相色谱理论而迅速发展起来的。它与经典液相色谱法的区别是填料颗粒小而均匀,小颗粒具有高柱效,但会引起高阻力,需用高压输送流动相,故又称高压液相色谱法(High Pressure Liquid Chromatography，HPLC).又因分析速度快而称为高速液相色谱法(High Speed Liquid Chromatography，HSLP)。 LC 与 GC的对比 3. 两者的差异 4. 液相色谱的特殊性 （2）传质速率慢 高效液相色谱法与气相色谱法对比 高效液相色谱法的特点 ①适用范围广； ②分离性能好； ③分析速度快； ④流动相可选择性范围宽； ⑤灵敏度较高； ⑥色谱柱可反复使用； ⑦流出组分容易收集； ⑧安全。 高效液相色谱的固定相 一、 高效液相色谱固定相以承受高压能力来分类，可分为刚性固体和硬胶两大类。 刚性固体以二氧化硅为基质，可承受7.0?108 ～ 1.0?109 Pa的高压。 硬胶主要用于离子交换和凝胶色谱中，它由聚苯乙烯与二乙烯苯基交联而成。可承受压力上限为3.5?108Pa。 二、固定相按孔隙深度分类，可分为表面多孔型和全多孔型固定相两类。 液相色谱的流动相 mobile phases of LC 2. 流动相类别 3. 流动相选择 4.流动相的要求 对流动相溶剂的要求是： （1）溶剂对于待测样品，必须具有合适的极性和良好的选择性。 （2）溶剂与检测器匹配。 对于紫外吸收检测器，应注意选用检测器波长比溶剂的紫外截止波长要长。所谓溶剂的紫外截止波长指当小于截止波长的辐射通过溶剂时，溶剂对此辐射产生强烈吸收，此时溶剂被看作是光学不透明的，它严重干扰组分的吸收测量，如苯。 对于折光率检测器，要求选择与组分折光率有较大差别的溶剂作流动相，以达到最高灵敏度。 （3）高纯度 由于高效液相色谱灵敏度高，对流动相溶剂的纯度也要求高。不纯的溶剂会引起基线不稳，或产生“伪峰”。 （4）化学稳定性好 （5）低粘度（粘度适中） 若使用高粘度溶剂，势必增高压力。常用的低粘度溶剂有丙酮、甲醇和乙腈等 液-固色谱法(吸附色谱) 液固色谱的固定相是固体吸附剂。吸附剂是一些多孔的固体颗粒物质，存在一些分散的具有表面活性的吸附中心。因此，液固色谱法是根据各组分在固定相上的吸附能力的差异进行分离，故也称为液固吸附色谱。 液固色谱法的固定相 吸附剂吸附试样的能力，主要取决于吸附剂的比表面积和理化性质，试样的组成和结构以及洗脱液的性质等。 （1）组分与吸附剂的性质相似时，易被吸附，呈现高的保留值； （2）当组分分子结构与吸附剂表面活性中心的刚性几何结构相适应时，易于吸附。吸附色谱成为分离几何异构体的有效手段； （3）不同的官能团具有不同的吸附能，因此，吸附色谱可按族分离化合物。 （4）吸附色谱对同系物没有选择性（即对分子量的选择性小），不能用该法分离分子量不同的化合物。 液固色谱法采用的固体吸附剂按其性质可分为极性和非极性两种类型。 非极性吸附剂最常见的是活性炭。 极性吸附剂包括硅胶、氧化铝、分子筛等。 液固色谱法的流动相 在液-固色谱中，选择流动相的基本原则是极性大的试样用极性较强的流动相，极性小的则用低极性流动相。 为了获得合适的溶剂极性，常采用两种、三种或更多种不同极性的溶剂混合起来使用，如果样品组分的分配比k值范围很广则使用梯度洗脱。 液液分配色谱 在液液色谱中，一个液相作为流动相，而另一个液相则涂渍在很细惰性载体上作为固定相。流动相与固定相应互不相溶。分配色谱过程与两种互不相溶的液体在一个分液漏斗中进行的溶剂萃取相类似。 以气液分配色谱法一样。分配系数（K）或分配比（k）小的组分，保留值小，先流出柱。然而与气相色谱法不同的是，流动相的种类对分配系数有较大的影响。 液液色谱法的固定相 液液色谱的固定相由载体和固定液组成。由于液相色谱中，流动相参与选择作用，流动相极性的微小变化，都会使组分的保留值出现较大的差异。因此，液相色谱中，只需几种不同极性的固定液即可。如