第五章 亲和层析.pptVIP

第五章 亲和层析分离技术 Affinity Chromatography 第一节　亲和层析概述 亲和层析:利用生物分子间专一的亲和力而进行分离的一种层析技术 历史 1910年就有人用不溶性淀粉选择吸附、提纯淀粉酶，这是最早的基于生物特异性进行分离纯化的实例。 但由于技术上的限制，主要是没有合适的固定配体的方法，所以在实验中没有广泛的应用。 20世纪60年代末，溴化氰活化多糖凝胶并偶联蛋白质技术的出现，解决了配体固定化的问题，使得亲和层析技术得到了快速的发展。 生物大分子的分离 优点： 1.纯化过程简单、迅速 2.分离效率高 3.实验条件温和 缺点： 1.亲和吸附剂通用性较差。针对某一分离对象就需要制备专一的吸附剂和建立相应的实验条件 2.配体的选择及其与基质的共价结合需 要烦琐的操作步骤 第二节　亲和层析基本原理及理论基础 原理：将具有亲和力的两个分子中一个固定在不溶性基质上，利用分子间亲和力的特异性和可逆性，对另一个分子进行分离纯化。 亲和力 生物分子间存在很多特异性的相互作用，如我们熟悉的抗原－抗体、酶－底物或抑制剂、激素－受体等等，它们之间都能够专一而可逆的结合，这种结合力就称为亲和力。 ?固相化 ? (I