第三章 KingFisher磁珠提取纯化系统.PDFVIP

KingFisher 磁珠提取纯化系统 在新流感及动物致病性疫病快速检测中的应用 编译： 欧阳志荃 高莹 近年来，全球不断有新的流感及动物性疫病的发生，从 2003 年的非典到 2009 年甲型 HIN1 流 感病毒在墨西哥，美国等快速传播感染数千人。新型流感及致病性疫病的快速检测与诊断成为防止 大规模疫病传播和感染的重要环节。目前正在全球各地传播的甲型 H1NI 流感是猪或人的一种急 性、人畜共患呼吸道传染性疾病，属新型甲型流感病毒，该毒株包含有猪流感、禽流感和人流感三种 流感病毒的基因片断，是一种新型流感病毒，可以人传染人。根据世界卫生组织最新报道，全球甲型 H1N1 流感蔓延至全球超过 70 个国家和地区，接近 3 万人感染，有超过 140 人死亡。目前世卫组织 已经正式公布甲型 H1N1 流感已经蔓延全球，流感大流行的警戒级别已经提升到最高的第六级。 图1：新型甲型H1N1病毒结构 实验室产品部技术通讯 9 图2 ：甲型H1N1病毒核酸基因分析图：显示为新型流感病毒 快速诊断和确诊甲型 H1N1 流感病毒成为 确定是否含有甲型 H1N1 型病毒的特异性片段。 全球各国控制甲型流感疫情的重点，根据世界卫 同时，核酸诊断的方法也大量用于动物致病性疫 生组织（WHO），美国 CDC 及中国卫生部公布 病如禽流感，新城疫病毒，牛痢疾病毒，猪瘟，蓝 《人感染猪流感诊疗方案 (2009 版 )》中确定甲型 耳病，狂犬病，牛绵状脑病 BSE 等疫情的监控和 流感 H1N1 确诊方法均为核酸诊断的方法，即从 诊断。 呼吸道标本（咽拭因子）或血清中分离病毒 KingFisher 磁珠提取纯化系统非常适合 RNA；通过荧光定量 RT-PCR 对上述标本检测 于新型流感病毒和动物致病性疫病的快速检测， 确认是否有感染甲型 HIN1 病毒。在整个诊断和 通过专利的 KingFisher 技术，通过特制的磁棒吸 确诊过程中，最重要的步骤之一是从呼吸道标本 附、转移和释放磁珠，从而实现磁珠 / 样品的转 （咽拭因子）或者血清中分离病毒 RNA，也是快 移，避免液体处理过程，提高自动化程度和提取 速诊断疫情的重要环节，世界卫生组织 （WHO） 的速度，可从不同的来源的样品如咽拭因子，血 于 2009 年 4 月 28 日公布的 CDC qRT-PCR 检 清，血浆，细胞培养物等获得高质量和高重复性 测方法中分为两个步骤，第一步待检样品中病毒 的 DNA/RNA 样品，获得的样品可以直接用于 核酸的提取，即病毒 RNA 的提取，在此步骤中 PCR, qRT-PCR 等试验。 WHO 推荐联了两种核酸纯化方法：磁珠法和 硅胶膜离心柱法，第二步进行荧光定量 RT-PCR， 图3：专利的KingFisher技术工作原理：移动磁珠/样品，而非液体 10 实验室产品部技术通讯 KingFisher 磁珠提取纯化系统是一个开放磁珠纯化平台，商业化的磁珠试剂盒都可以在该系统 上运行，如用以下用于病毒 RNA 提取的各种试剂盒均可在 KingFisher 磁珠提取纯化系统，并有相应 的经确认的磁珠纯化程序供大家下载，下载地址为 /kingfiher. NucleoMag Virus, Macherey-Nagel* InviMag Virus RNA, Invitek*