奥曲肽的合成及其分离纯化.PDFVIP

西北大学学报( 自然科学网络版) 2006 年 7 月，第 4 卷，第 4 期 Science Journal of Northwest University Online Jul.2006, Vol.4. No.4 奥曲肽的合成及其分离纯化 王 欣，卫引茂，耿信笃 （西北大学现代分离科学研究所，陕西 西安 710069 ） 摘 要: 奥曲肽是人工合成的生长抑素8 肽，其作用与天然生长抑素ST 相似，已应用于临床上 治疗胰腺炎等重症。以 Fmoc-Thr(tBu)-ol-2-Cl(Trt)树脂为合成起点，采用对碱敏感的芴甲氧羰基 (Fmoc)作为α-氨基的保护基，并确定与之配套的侧链保护策略，探索出适宜的奥曲肽合成方案。 结果表明：粗产物用还原氧化法进行氧化对接，并用反相高效液相色谱（RPLC ）纯化，所得目 标产物的总收率达95.4 mg/g 树脂, 纯度为97.8 ％。质谱鉴定确认，合成产物分子量与计算值相符。 关 键 词: 固相多肽合成；奥曲肽；二硫键 中图分类号：O629.72 文献标识码：A 文章编号：1000-274X(2006)0224-05 奥曲肽（octreotide ）为生长抑素 8 肽，分子序列为 D-Phe-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-ol ，在分子 序列第 2 位和第 7 位形成一对二硫键。奥曲肽可明显抑制胰腺细胞的外分泌功能、酶原颗粒和细胞质的积 聚，防止急性胰腺炎进一步恶化，在临床上被用于治疗重症急性胰腺炎，此外还用于治疗上消化道静脉破 裂出血、胃溃疡出血及消化系统内分泌肿瘤等疾病。与天然生长抑制素相比，奥曲肽作用增强，半衰期延 长，副反应减少[1]，具有良好的临床应用前景。 芴甲氧羰基(Fmoc)固相合成法[2]采用对碱敏感的 Fmoc 基团进行α-氨基的保护，相对于经典 Merrifield 固相合成法副反应较少，现已被广泛地应用于多肽合成领域，合成出胸腺肽[3]、HWTX-I[4]、降钙素基因相 [5] [6] 关肽 等具有生物活性的多肽。曾有报道以Fmoc-Thr-ol-Acetal 树脂为合成起点来合成醋酸奥曲肽 ，故本 文探索性的以 Fmoc-Thr-ol-2-chrolocide 树脂为合成起点，采用 Fmoc 固相合成方法，经 1–羟基苯骈三氮唑 (HOBt) －苯并三唑四甲基脲四氟硼酸盐(TBTU) －二异丙基乙胺(DIEA)缩合，用三氟乙酸(TFA) －苯甲硫醚 －乙二硫醇－苯酚－水脱保护等步骤合成奥曲肽。裂解产物经二硫苏糖醇等溶液被还原成还原型奥曲肽， 再用谷胱甘肽氧化法形成分子内二硫键。最后，经反相高效液相色谱（RPLC ）纯化，得到产品。 1 实验部分 1.1 仪器和试剂 高效液相色谱仪（LC-10A , 日本 shimadzu 公司），包括两台 LC-10ATVP 泵，一台 SPD-10AVP 紫外- 可见检测器，Rheodyne 7725 手动进样阀和 class-vp 工作站；C18 反相分析柱（150 mm×4.6 mm I.D. ，5 μm 粒度）；真空冷冻干燥机（Christ Alpha 1-4, B.Braun Biotech international ）；MALDI-TOF(Matrix-assisted laser 收稿日期: 2005-05-13 审 稿 人：申烨华，女，西北大学化学系副教授。 desorption/ ionization-time-of- flight)质谱仪（Axima CFRplus 型号，日本 shimadzu 公司）；721-W 分光光度 计（上海第三分析仪器厂）；实验所用超纯水由Barnstead E-Pure 净水器（美国，Barnstead Co. Ltd ）制备。 实验所用 Fmoc-Thr(tBu)-ol-2-Cl(Trt) 树脂（取代值 0.3 mmol/g ，交联度 1% ，100-200mesh ）， Fmoc-Cys(Trt)-OH 、Fmoc-Lys(Boc)-OH 、Fmoc-D