利用高效阴离子色谱快速检测筛选环糊精糖基转移酶产生菌.PDF

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００９，２９（５）：９５～９８ 利用高效阴离子色谱快速检测筛选 环糊精糖基转移酶产生菌 １，２，３ １ ２，３ １ 张　斌 　夏永振 　范仲学 　祁庆生 （１山东大学微生物技术国家重点实验室　济南　２５０１００　２山东省农业科学院高新技术研究中心　济南　２５０１００） （３山东省作物与畜禽品种改良生物技术重点实验室　济南　２５０１００） 摘要　利用高效阴离子色谱快速直接地检测微生物发酵液中的环糊精成分，尤其是大环环糊精 的组成，进而创造了一种能快速准确地从土壤中筛选产环糊精糖基转移酶菌种的方法。共分离 了１４９个产胞外淀粉水解酶的微生物菌株，利用高效阴离子交换色谱共检测了其中１１株菌，其中 ６株主要产ＣＤ，５株主要产ＣＤ，主要产ＣＤ 的没有。在直接鉴定产生环糊精糖基转移酶菌株的 ６ ７ ８ 过程中，也可以定量检测各种环糊精包括大环糊精（ＣＤ大于８）的含量。 关键词　环糊精糖基转移酶　环糊精　高效阴离子交换色谱 中图分类号　Ｑ５ 　　环糊精糖基转移酶（ｃｙｃｌｏｄｅｘｔｒｉｎｇｌｕｃａｎｏｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ， 精（ｌａｒｇｅｒｉｎｇｃｙｃｌｏｄｅｘｔｒｉｎ）在生产中的应用引起了世人 ? ＣＧＴａｓｅＥＣ２．４．１．１９）是一种具有多种催化活性的酶。 的关注，它们在医药和化工领域具有潜在的应用价值。 它催化可逆的分子内和分子间的 －１，４葡萄糖苷键 　　许多环糊精糖基转移酶可以催化产生８个葡萄糖 α ［７］ 的生成反应，也可催化淀粉及其衍生物的水解反应。 组成的环糊精（ＣＤ） 。环糊精糖基转移酶在催化产 ８ 到目前为止已经在很多细菌中发现ＣＧＴａｓｅ，其中最多 生环糊精的起始阶段会产生不同大小的环糊精。为了 的是芽孢杆菌 （Ｂａｃｉｌｌｕｓ），另外在克雷伯氏杆菌 进一步研究环糊精糖基转移酶在不同阶段产生环糊精 （Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）、嗜热菌 （Ｔｈｅｒｍｏｂａｃｔｅｒ）、嗜热厌氧菌 的能力大小，以及不同细菌产生的不同环糊精的能力， （Ｔｈｅｒｍｏａｎａｅｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）和放线菌（Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｓ）中也 本试验发展了一种快速直接检测筛选环糊精产生菌的 有发现。环糊精糖基转移酶可以催化产生环糊精，因 方法，同时，这种方法也能确定各种环糊精的含量。 ［１］ 此在生物技术领域具有广泛的用途 。 １　材料与方法 　　研究和应用最多的是分别有６、７、８个葡萄糖组成 的环糊精（ＣＤ、ＣＤ、ＣＤ）。利用来自不同菌种的环糊 １．１　材　料 ６ ７ ８ ［２］ 　　环糊精 ＣＤ ～ＣＤ 由德国ＷａｃｋｅｒＣｈｅｍｉｅ公司提 精糖基转移酶，如软化芽孢杆菌Ｂａｃｉｌｌｕｓｍａｃｅｒａｎｓ 、 ６ ９ ? ［３］ 供，直链淀粉由德国Ｚｉｍｍｅｒｍａｎ实验室提供，平均分子 环状芽孢杆菌 ２５１ 和 ａｌｋａｌｏｐｈｉｌｉｃＢａｃｉｌｌｕｓｃｌａｒｋｉｉ ［４］ 量为２８０．９０ｋＤａ。可溶淀粉为德国 Ｍｅｒｃｋ公司产品 ７３６４ ，这三种环糊精已经得到大规模的合成。由于 目前的环糊精糖基转移酶合成 ＣＤ 产量太低，因此８ （Ｄａｒｍｓｔａ