第七讲酶的非水相催化.ppt

⑤热稳定性 许多酶在有机介质中热稳定性比在水溶液中的热稳定性更好。 胰脂肪酶在水溶液中100℃时很快失活；而在有机介质中，在相同的温度条件下半衰期却长达数小时。 酶在有机介质中的热稳定性还与介质中的水含量有关，通常情况下，随着介质中水含量的增加，其热稳定性降低。 核糖核酸酶在有机介质中水含量从0.06g／g蛋白质增加到0.2g／g蛋白质时，半衰期从120min减少到45min 细胞色素氧化酶在甲苯中水含量从0.3％增加到l.3％时，半衰期从4h减少到1.7min 在有机介质中，酶的热稳定性之所以增加，可能是由于有机介质中缺少引起酶分子 变性失活的水分子所致。因为水分子会引起酶分子中天冬酰胺和谷氨酰胺的脱氨基作用， 还可能会引起天冬氨酸肽键的水解、半胱氨酸的氧化、二硫键的破坏等。 某些酶在有机介质与水溶液中的热稳定性 酶 介质条件 热稳定性 猪胰脂肪酶 三丁酸甘油酯 水， pH7.0 T1/2 26 h T1/2 2 min 酵母脂肪酶 三丁酸甘油酯/庚醇 水，pH7.0 T1/2 =1.5 h T1/2 2 min 脂蛋白脂肪酶 甲苯，90℃，400 h 活力剩余40％ 胰凝乳蛋白酶 正辛烷，100℃ 水，pH 8.0, 55℃ T1/2 = 80 min T1/2 = 15 min 枯草杆菌蛋白酶 正辛烷，110℃ T1/2 = 80 min 核糖核酸酶 壬烷，110℃，6 h 水，pH 8.0, 90℃ 活力剩余95％ T1/2 10 min 酸性磷酸酶 正十六烷，80℃ 水，70℃ T1/2 = 8 min T1/2 = 1 min 腺苷三磷酸酶 ( F1-ATPase) 甲苯，70℃ 水， 60℃ T1/2 24 h T1/2 10 min 限制性核酸内切酶 （Hind Ⅲ） 正庚烷，55℃，30d 活力不降低 β-葡萄糖苷酶 2-丙醇，50℃，30 h 活力剩余80％ 溶菌酶 环己烷，110℃ 水 T1/2 =140 min T1/2 = 10 min ⑥pH“记忆”与pH “忘记” 在水溶液中，pH值是影响酶催化的重要因素。因为在水溶液中缓冲液的pH值决定了酶分子活性中心基团的解离状态和底物分子的解离状态，从而影响酶与底物的结合和催化反应。 然而在有机溶剂中，不存在质子获得或丢失的条件，那么，在有机介质中，pH值是如何影响催化反应呢？ pH“印记”或pH“记忆” 在有机介质反应中，酶所处的pH环境与酶的冻干或吸附到载体之前所使用的缓冲液pH值相同。因为酶在冻干或吸附到载体之前，先置于一定pH值的缓冲液中，缓冲液的pH值决定了酶分子活性中心基团的解离状态。当酶分子从水溶液转移到有机介质中时，酶分子保留了原有的pH印记，原有的解离状态保持不变，即酶分子在缓冲液中所处的pH状态仍然保持在有机介质中。 酶在有机介质中催化反应的最适pH值通常与酶在水溶液中反应的最适pH值接近或相同。 利用酶的这种pH印记特性，可以通过控制缓冲液中pH值的方法，达到控制有机介质中酶催化反应的最适pH值。 pH“忘记” 由于受到有机相缓冲液的影响，控制着有机介质中酶的解离状态，使酶分子的pH“印记”特性不再起作用，酶完全“忘记”干燥前它所处的溶液pH。 研究表明，在含有微量水的有机介质中，某些疏水性的酸与其相对应的盐组成的混合物，或者某些疏水性的碱与其相对应的盐组成的混合物可以作为有机相缓冲液使用，以中性或离子对的形式溶解于有机溶剂中，这两种存在形式比例控制着有机介质中酶的解离状态。 有些酶在有机介质中催化的最适pH值与水溶液中催化的最适pH值有较大差别，需要在实际应用时加以调节控制。 7.6、有机介质中酶催化反应的条件及其控制 1、有机介质中酶催化反应的类型 转移反应 醇解反应 合成反应 氧化还原反应 裂合反应 （1）转移反应 R1COOR2+R3COOH R1COOR3+R2COOH 脂肪酶 转酯反应 酯酶 （2）醇解反应 R1-CH CH2-C=O CH2-C=O +R2OH O R1-CH CH2-COOH CH2-COOR2 假单胞脂肪酶 (3)合成反应 R1COOH+R2OH R1COOR2+HOH 脂肪酶 酯酶 R1CHCOOH+R2CHCOOH H2NCHCONHCHCOOH+H2O NH2 NH2 R1 R2 蛋白酶 （4）氧化还原反应 RCHO+NADH+H+ RCH2OH+NAD+ R1COR2+NADH+H+ R1CH(OH)R2+NAD+ 醇脱氢酶 （5）裂合反应 RCHO+HCN RCH(OH)CN 醇腈酶 2、有机介质中酶催化反应的控制 酶的种类和浓度 底物的种类和浓度 有机溶剂的种类 水含量 温度 pH值 离子强度 7.7、酶非水相催化的应用