抗原抗体反应的类型研究.ppt

* * * * * * * * 抗原抗体反应的类型 可溶性抗原与相应抗体结合所产生的沉淀反应（precipitation）； 颗粒性抗原与相应抗体结合所发生的凝集反应（agglutination）； 抗原抗体结合后激活补体所致的细胞溶解反应（cytolysis）； 细菌外毒素或病毒与相应抗体结合所致的中和反应（neutralization）； 标记免疫的抗原抗体反应。每种反应类型都包括若干实验技术。 第三章免疫原和抗血清的制备 　　抗原和抗体是免疫学检测的两个重要因素；也是整个免疫反应的基本条件。　　　　　第一节 免疫原的制备 　免疫原是诱导机体产生抗体和致敏淋巴细胞，并能在体内外与抗体或致敏淋巴细胞发生特异性反应的物质。 　　颗粒性抗原包括人和各种动物细胞抗原以及各种细菌抗原和寄生虫体抗原。血细胞抗原制备比较简单，常用的细胞抗原为绵羊红细胞，采用该细胞制备溶血素，直接取新鲜绵羊红细胞，以无菌生理盐水洗涤3次（每次离心2000r／min 10min），最后配成106／ml浓度的细胞悬液，即可应用。细菌抗原多用液体或固体纯培养物，经集菌后处理。 一、颗粒性抗原的制备 　　细菌的鞭毛抗原需用有动力的菌株，菌液用0.3％－0.5％甲醛处理，而菌体抗原则需要100℃加温2－2.5h去掉鞭毛抗原后应用。毒素抗原则需要在杀菌后再加 0.5％－l％氯化钙溶液。寄生虫和真菌抗原除用破碎法加工粗提外，大多要加以适当纯化。有些细胞膜亦可制成颗粒性抗原。颗粒抗原悬液呈浑浊状或乳浊状，多采用静脉内免疫法，较少加佐剂作皮内注射。 （一）组织和细胞粗抗原的制备 　 １.组织细胞抗原的制备　所用组织必须是新鲜的或低温保存的。器官或组织材料取得后应立即去除表面的包膜或结缔组织以及一些大血管。脏器应用生理盐水灌注，去除血管内残留的血液及有形成分，再用含0.5ｇ／LNaN3生理盐水洗去血迹及污染物。将洗净的组织剪成小块，然后进行粉碎。粉碎的方法有两类：①高速组织捣碎机法②研磨法 二、可溶性抗原的制备和纯化 2．组织细胞或培养细胞可溶性抗原的制备　　制备抗原的细胞包括正常细胞、传代细胞或病理细胞（如肿瘤细胞）。细胞抗原一般分为三个组分：膜蛋白抗原、细胞质抗原（主要为细胞器）和细胞核与核膜抗原。三种抗原的制备均需将细胞破碎，其方法有以下几种。 （1）反复冻融法：将细胞或整块组织置－20℃冰箱内冻结，然后置室温融化，如此反复2次，大部分组织细胞及细胞内的颗粒可冻融破碎。 （2）超声破碎法：常用于处理微生物和组织细胞。 （3）自溶法：利用组织和微生物的自身酶系统，在一定的pH和温度下，使其细胞裂解。自溶的温度，对动物组织细胞常选0－4℃，而对待微生物常选室温（22－25℃）。自溶时常需加入少量防腐剂，如甲苯或氯仿等，因NaN3抑制酶的活力，则不宜使用。 （4）酶处理法：　　溶菌酶、蜗牛酶、纤维素酶等，在一定的条件下能消化细菌和组织细胞。如溶菌酶在碱性条件下，PH8.0可对革兰阳性菌细胞壁的溶菌作用，该法适用于多种微生物。酶破坏细胞具有作用条件温和、内含物成分不易受到破坏、细胞壁损坏的程度可以控制等特点。 （5）表面活性剂处理法：　　在适当的温度、pH及低离子强度的条件下，表面活性剂能与脂蛋白形成微泡，使膜溶解或渗透性改变。常用的表面活性剂有十二烷基硫酸钠（SDS阴离子型）、二乙胺十六烷基溴（阳离子型）、聚山梨酯（非阳离子型）、苯扎溴胺等。该方法常用于破碎细菌，且作用比较温和。在提取核酸时常用此方法破碎细胞。 （二）超速离心分离法 　超速离心分离法最常用于分离亚细胞成分及大分子蛋白质，它是进一步纯化的第一次过筛。 （三）选择性沉淀法 　选择性沉淀法是采用各种沉淀剂或利用某些条件促使抗原成分沉淀的方法。１.核酸去除法 ２.盐析沉淀法 　（1）抗原的粗筛 　（2）提取丙种球蛋白 　（3）抗原的浓缩 ３.有机溶剂沉淀法 ４.水溶性非离子型聚合物沉淀法 常用聚合物为聚乙二醇（Polyethyleneglycol，PEG）及硫酸葡聚糖。水溶性聚合物沉淀蛋白质的机制仍不十分清楚，大致机制有如下解释：①聚合物与蛋白质形成共沉淀物；②聚合物与蛋白质之间发生水的重分配；③聚合物与蛋白质形成复合物。 （四）凝胶过滤　　凝胶过滤又名分子筛层析，凝胶是具有三维空间多孔网状结构的物质，经过处理平衡后，装入层析柱内成为分子筛的支撑物。 （五）离子交换层析 　离子交换层析是利用一些带电离子基团的凝胶或纤维素，吸附交换带有相反电荷的蛋白质抗原。 * * * * * * * * * * * * * * * * * * * *