HPLC测定利肺片中五味子醇甲的含量--终审稿教程.docVIP

HPLC测定利肺片中五味子醇甲的含量 孙楠，曲香仁，王侠 （通化万通药业股份有限公司，吉林 通化134001） [摘要] 目的：建立高效液相色谱法测定利肺片中五味子醇甲含量的方法。方法：采用Ultimate XB–C18色谱柱（4.6mm×250mm，5μm）；流动相：甲醇-水（13︰7）；流速：1.0ml/min；检测波长：250nm。结果：五味子醇甲线性范围0.1002～2.0040(g(r＝1)，平均回收率和RSD分别为97.53%，0.68%。结论：方法简便、可靠，可用于利肺片中五味子醇甲含量测定。 [关键词] 高效液相色谱法；五味子醇甲；利肺片；含量测定 利肺片为《部颁标准中药成方制剂》第八册中品种[标准编号：WS3-B-1547-93]。本项目研究拟对利肺片进行质量标准提高，原标准无含量测定项，按照《药品注册管理办法》及国家药品审评中心关于中药复方制剂质量标准研究的具体要求，首先需要建立中药复方制剂中君药的含量测定方法。本处方的君药为百部，百部中所含的成分无适合的含量测定方法，故选择臣药五味子中的代表性成分五味子醇甲进行含量测定，五味子醇甲具有收敛固涩益气生津mm×250mm，5μm）；流动相：甲醇-水（13︰7）；检测波长：250nm；流速：1.0ml/min；柱温：室温；理论板数按五味子醇甲峰计算应不低于2000。 溶液制备 2.2.1 对照品溶液 精密称取五味子醇甲对照品适量，加甲醇制成每1ml含五味子醇甲0.1mg的溶液，即得。200～400nmnm波长处有最大吸收，故选定检测波长为250nm。 2.4 流动相的选择　 五味子醇甲为木脂素类化合物，根据文献资料，分别选择甲醇-水（60：40）、甲醇-水（13：7）作为流动相，结果甲醇-水（13：7）分离效果更好，故确定为本法的流动相。 2.5 提取纯化方法考察　 五味子醇甲为木脂素类化合物，易溶于甲醇，因此选择甲醇作为提取溶剂；提取方法选择超声提取法和加热回流提取法，试验结果表明，超声提取法与加热回流提取法比较，二者的提取率相近，但提取物的纯度前者高于后者，故选择甲醇作为提取溶剂的超声提取方法，超声处理30分钟，滤过，取续滤液，用微孔滤膜（0.45(m）滤过，即得。 2.6 干扰试验 分别吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性样品溶液各10(l进样，测定，五味子醇甲对照品、供试品在12min左右出现五味子醇甲吸收峰，阴性样品色谱图在五味子醇甲相应的保留时间附近无干扰峰（见图1），证明本法具有良好的专属性。 A 对照品 B 供试品 C 阴性样品 图1 样品HPLC图 2.7 线性关系考察 分别精密吸取五味子醇甲对照品溶液1、5、10、15、20(l 注入液相色谱仪，以进样量（(g）为横坐标，峰面积积分值为纵坐标（见表1）绘制标准曲线（见图2），得回归方程Y = 36.07 X + 0.1377 、r＝1，由此确定五味子醇甲在线性范围0.1002～2.0040(g线性关系良好。 表1 线性关系考察 进样量（(g） 峰面积积分值 0.1002 3.671 0.5010 18.265 1.0020 36.380 1.5030 54.289 2.0040 72.408 图2 线性关系曲线 2.8 稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液及对照品溶液各10(l，每隔一定时间分别注入液相色谱仪，依法测定，以五味子醇甲峰面积积分值为指标，测定其稳定性，结果见表3。 表2 稳定性试验 时间（小时） 对照品峰面积积分值 样品峰面积积分值 0 36.399 37.335 1 36.433 37.150 2 36.385 37.240 4 36.675 37.395 8 36.540 37.408 36.4864 37.3056 RSD（%） 0.33 0.29 稳定性考察结果，对照品和供试品RSD分别为0.33%、0.29%，表明对照品和供试品中五味子醇甲峰面积积分值的稳定性良好，8小时内测定结果可靠。 2.9 精密度试验 精密吸取供试品溶液及对照品溶液各10(l，分别注入液相色谱仪，连续进样5次，依法测定，记录峰面积积分值，计算，考察精密度，结果见表4。 表3 精密度试验 序号 对照品峰面积积分值 样品峰面积积分值 1 36.167 39.352 2 36.189 39.383 3 36.160 39.381 4 36.187 39.395 5 36.156 39.463 36.1718 39.3948 RSD(%) 0.042 0.105 精密度考察结果，对照品和供试品的RSD分别为0.042%、0.105%，表明仪器、方法的精密度良好。 2.10 重现性试验 精密称取同一批样品（批号：2009030