微生物第八章 4.ppt

第四节 基因重组与遗传育种 8.4.1 基因重组 两个DNA分子之间发生分子水平上的重新组合，产生具有不同核苷酸序列的新的DNA分子，这一过程叫做基因重组； 位点专一性重组 同源重组 转座重组 不正常重组 同源重组的过程 同源序列：碱基序列相似的两段DNA序列； 同源重组：两个具有同源序列的DNA之间发生相互性或非相互性交换重组； 同源重组过程：DNA解链、单链断裂、配对、重接形成异源双链区，然后经DNA复制而纯化； 有性繁殖与同源重组 有性繁殖期间，两个性细胞质配、核配形成二倍体合子，此时，亲代的两个染色体相遇，并发生一定频率的基因重组，使减数分裂产生的子代的基因组具有亲代的特性； 基因重组在具有性繁殖的生物中是普遍存在的现象，有利于基因多样性； 原核生物的基因重组 原核生物缺乏有性繁殖，基因重组并不普遍存在，相对频繁的基因突变，是基因多样性的来源； 原核生物中存在几种特殊的基因水平转移方式：转化、转导、接合；在一定条件下，这几种基因水平转移方式，能够导致原核生物之间发生基因重组； 通过上述方式发生基因重组，而形成的具有新的基因型的细胞，称为重组子； 8.4.2 细菌的转化 感受态细胞（competence cell）：某些微生物在特定环境条件下出现的，能够将胞外DNA片段吸收进入细胞的一种特殊生理状态； 肺炎双球菌、芽孢杆菌、假单胞菌、大肠杆菌等细菌具有感受态；真核的酿酒酵母等能够形成感受态； 转化（transformation）：感受态细胞吸收外源DNA进入细胞，而发生基因重组的过程；通过转化而形成的重组子，也称为转化子（ transformant ）； 自然感受态的形成机制 细胞在生长过程中不断释放感受态因子，其浓度随细胞密度的增加而增加； 高浓度的感受态因子作用于细胞膜上的受体蛋白，传递细胞浓度信号，导致自溶素基因表达 ； 产生的自溶素激活细胞表面的DNA结合蛋白和核酸酶，使细胞处于感受态； 感受态细胞吸收DNA的特点 小于15kb的DNA片段和质粒可以被感受态细胞吸收； G-细菌可以吸收dsDNA，然后在胞内降解为ssDNA； G+细菌在胞外先将dsDNA降解为ssDNA，然后再吸收进入细胞； 转化和转化子的形成 感受态细胞吸收的外源DNA，如果与自身染色体具有同源性，就有一定的几率发生同源重组，产生杂合的DNA区域； 当DNA复制时，产生纯合的新型子代DNA；细胞分裂时，新型子代DNA进入子细胞，形成的具有新的基因型的转化子； 转染 （transfection）和广义的转化 用提纯的噬菌体DNA，通过转化的方式转入宿主细胞，结果产生完整的子代病毒颗粒，称为转染； 广义的转化：将游离DNA片段或质粒转入受体细胞的技术手段，是基因工程的基本方法之一： 人工感受态转化 原生质体转化 电转化：击穿细胞壁和细胞膜 8.4.3 细菌的转导 转导 （transduction）：通过转导噬菌体，借助噬菌体的感染能力，将外源DNA导入受体细胞，而发生基因重组的方式； 转导噬菌体：噬菌体衣壳内全部为外源DNA的完全缺陷型噬菌体，或者衣壳内带有部分外源DNA的部分缺陷型噬菌体； 完全缺陷型噬菌体的形成 子代噬菌体在宿主细胞内装配时， 因“误切” 和“误包”而将宿主的DNA片段装进噬菌体衣壳，形成只含宿主DNA片段的完全缺陷型噬菌体； 部分缺陷型噬菌体的形成 整合在溶源化细胞染色体上的原噬菌体，去整合化时可能发生“误切”，自身部分DNA与旁侧的染色体发生了交换而切割下来，形成部分缺陷的噬菌体核酸； 部分缺陷的噬菌体核酸仍然能够正常复制和基因表达，并装配、裂解宿主细胞，产生部分缺陷型的子代噬菌体；几率低于10-6； 完全普遍性转导 完全缺陷型噬菌体感染另外的宿主细胞，而将来自供体菌的一段外源DNA转入受体菌； 如果外源DNA与宿主染色体发生了基因重组，则形成具有新基因型的重组子，叫做转导子（transductant），这种基因重组形成重组子的方式，称为完全转导； 由于完全缺陷型噬菌体能将供体菌的任何一段DNA转入受体菌，由此而发生基因重组，形成重组子的方式，也称完全普遍性转导； 普遍性转导的其它结果 如果由完全缺陷型噬菌体转入的供体菌DNA片段，没有发生基因重组，而被受体菌降解，则称为为转导失败； 如果转入的DNA片段不能与宿主染色体发生基因重组，也没有被降解，而是存在于受体菌中，称为流产转导； 局限性转导 由部分缺陷型噬菌体感染受体菌，将来自供体菌染色体特定位点的核酸片段转入受体菌，如果发生基因重组，则形成具有新的基因型的转导子； 低频转导 在溶源菌的诱发裂解物中，部分缺陷型噬菌体的含量极低（低于10-9），称为低频转导裂解物； 用这种低频转导裂解物，在低感染复数下进行转导，只能得到极少量的转导子，称为低频转导； 感染复数（m.o