磷酸盐缓冲液法提取茶叶多酚氧化酶的工艺研究.pdf

Vbl．8 第8卷第2期 淮阴师范学院学报(自然科学版) No．2 2009年6月 HUAIYIN SCIENCE Jun．2009 JOURNALOF TEACHERSCOLLEGE(NATURALEDITION) 磷酸盐缓冲液法提取茶叶多酚氧化酶的工艺研究 王丽霞1，黄文成1，林启训2，陆则坚2 (1．漳州师范学院生物科学与技术系，福建漳州363000；2．福建农林大学食品科技学院，福建福州350(102) 摘要：采用磷酸盐缓冲液提取法，研究了从茶鲜叶中提取多酚氧化酶的最佳工艺条件．结果 表明，茶鲜叶多酚氧化酶提取的最佳工艺条件为pH6．4，料液比(茶叶g：缓冲液mL)为I：1，离 000 min． 心转速为9 r／rain，离心时间35 关键词：磷酸盐缓冲液；茶；多酚氧化酶 中图分类号：$571．101文献标识码：A 文章编号：1671—6876(2009)02．0166—03 0引言 茶PPO(QH602：氧化还原酶，E．C．1．10．3．1)是茶中一类重要的末端氧化酶类，其无论在茶树生理 代谢还是在茶nf加-r中对多酚类物质的氧化变化都起着重要作用．目前研究最多的是它的性质u刮、细 胞定位、茶树的品种鉴定、生理遗传方面的研究以及对茶叶品质尤其是对红茶品质形成的作用b。J．而 茶树活体中PPO的提取工艺未见报道． 本文采用黄旦品种作为试验材料，提取鲜叶中PPO，研究了料液比、缓冲液pH、离心转速以及离心 时间等因素对提取工艺的影响，并通过正交实验以蛋白酶浓度、酶比活力为指标，筛选出茶鲜叶PPO提 取的最佳工艺条件． 1材料与方法 1．1材料与样品制备 13 材料：供试鲜叶为黄旦品种，采自福建省安溪县，2008年5月49：00—1l：00时采集一芽二叶初 展新梢，天气晴． 酶液制备：采用缓冲溶液法[8]．取一定量茶鲜叶，加入少量聚乙烯吡咯烷酮及石英砂，以一定体积 mol／LPB为缓冲液，将样品磨碎，用4层纱布过滤，于冷冻离心机中离心，弃沉淀，得 不同pH预冷的0．1 上清液，即获得多酚氧化酶粗酶液，收集并保存于4。C下备用． 1．2仪器与试剂 型紫外可见分光光度计(上海光谱仪器有限公司)，Jz．Ⅱ型均质器(铁道部电化院四方电器设备厂)． 清蛋白，95％乙醇，浓磷酸等，试剂均为国产分析纯． 1．3试验方法 1．3．1蛋白质浓度测定 考马斯亮蓝结合法测定蛋白质浓度旧]． 1．3．2PPO活力的测定 mL 酶活反应体系包括：0．6mL酶液、0．9mL0．1moIML邻苯二酚(C6H602)、1．5 0．01moL／L PB缓冲液(pH7．2)¨o|：将酶液与底物和缓冲液混合后，即放置于752P型紫外可见光分 收稿日期：2009-01-08 基金项目：福建省自然科学基金资助项目(B9910010) 作者简介：王丽霞(1979．)，女，江苏扬中人，讲师，硕士，主要从事农产品加工及生化研究 万方数据 第2期 王丽霞等：磷酸盐缓冲液法提取茶叶多酚氧化酶的工艺研究 167 光光度计中，在525 am处测定光密度值，找到酶活力最大的反应时间．在测定条件下OD铬每变化0．001 单位的酶量定义为1个酶活力单位(U)．酶活力(U)=005．×1000E11】． 计算公式：酶比活力=酶活力单位(U)／mg蛋白质 1．3．3制备条件的优化 1)料液比对提取的影响：称取茶鲜叶5份，加入少量聚乙烯吡咯烷酮及石英砂，以pH6．8预冷的 0．1 500 滤，于冷冻离心机中以4 r／rain，离心30min，弃沉淀，得上清液，即获得多酚氧化酶粗酶液，测定蛋白