06第七章酶的非水相催化第八章酶定向进化研究.ppt

第一节 酶定向进化的特点 一、适应面广 二、目的性强 三、效果显著 第二节 酶基因的随机突变 一、易错PCR技术 二、DNA重排技术 三、基因家族重排技术 第三节 酶突变基因的定向选择 一、突变基因文库的构建 （一）构建基因文库的质量要求 文库的包容性 文库的完整性 （二）构建突变基因文库的主要过程 载体的选择 基因重组 组装突变基因文库 二、突变基因的筛选 （一）定向选择环境条件的设定 （二）高通量筛选技术 平板筛选法 荧光筛选法 噬菌体表面展示法 酵母细胞表面展示法 第四节 酶定向进化的应用 一、提高酶的催化效率 二、增加酶的稳定性 三、改变酶的底物特异性 * 近代有机相酶催化研究再次起飞的里程碑 Zaks,A.and Kilbanov,A.M(1984),Science224,1249-1251 ZoKs,A. and Kilbanov,A.M.(1985),Proc.Natl,Acad,Sci.u.s.a.82,3192-3196 * 　　1)含水率较高，最大可达30%-45%。水分有利于降低油的黏度、提高稳定性，但降低了油的热值； 　　2)pH值低，故贮存装置最好是抗酸腐蚀的材料； 　　3)密度比水大，与水的比值约为1.2； 　　4)具有“老化”倾向，加热不宜超过80℃，宜避光、避免与空气接触保存； 　　5)润滑性能好。 　　6）优良的环保特性：硫含量低，二氧化硫和硫化物的排放低、生物柴油的生物降解性高达98％，降解速率是普通柴油的2倍，可大大减轻意外泄漏时对环境的污染； 　　7）较好的低温发动机启动性能；  　　8）较好的安全性能：闪点高，运输、储存、使用方面安全； 　　9) 十六烷值高，燃烧性能好于柴油。 　　10) 无须改动柴油机，可直接添加使用，同时无需另添设加油设备、储存设备及人员的特殊技术训练。  第四节 有机介质中酶催化反应的条件及其控制 酶在有机介质中可以催化多种反应，主要包括：合成反应、转移反应、醇解反应、氨解反应、异构反应、氧化还原反应、裂合反应等。 水含量 酶的种类和浓度 底物的种类和浓度 有机溶剂的种类 温度 pH 有机介质中酶催化反应的条件 一、 水含量 1． 影响酶反应体系中需水量的因素 a．不同酶需水量不同 b. 同一种酶在不同有机溶剂中需水量不同 溶剂疏水性越强，需水量越少 二、 酶的选择 1、 酶种类的选择：脂肪酶、蛋白酶、次黄嘌呤氧化酶、过氧化氢酶，过氧化物酶等。 2．酶形式的选择 （1）酶粉： 例如：有人研究a-胰凝乳蛋白酶在酒精中转酯反应，发现催化活性随反应体系中酶量的减少而显著增加。 （２） 化学修饰酶： 例如：SOD酶经糖脂修饰后变成脂溶性，它对温度、PH、蛋白酶水解的稳定性均高于天然SOD。 （３） 固定化酶： 把酶吸附在不溶性载体上（如硅胶、硅藻土、玻璃珠等）制成固定化酶，其对抗有机介质变性的能力、反应速度、热稳定性等都可提高。 （３） 固定化酶： 三、 溶剂及反应体系的选择 水溶性有机溶剂：甲醇、乙醇、丙醇、正丁醇、甘油、丙酮等。 水不溶性的有：石油醚、己烷、庚烷、苯、甲苯、四氯化碳、氯仿、乙醚、戊醚等。 第五节 酶非水相催化的应用 酶 催化反应 应用 脂肪酶 肽合成 青霉素G前体肽合成 酯合成 醇与有机酸合成酯类 转酯 各种酯类生产 聚合 二酯的选择性聚合 酰基化 甘醇的酰基化 蛋白酶 肽合成 合成多肽 酰基化 糖类酰基化 羟基化酶 氧化 甾体转化 过氧化物酶 聚合 酚类、胺类化合物的聚合 多酚氧化酶 氧化 芳香化合物的羟基化 胆固醇氧化酶 氧化 胆固醇测定 醇脱氢酶 酯化 有机硅醇的酯化 手性药物两种对映体的药理作用 1992年，美国FDA明确要求对于具有手性特性的化学药物，都必需说明其两个对映体在体内的不同生理活性、药理作用以及药物代谢动力学情况。 许多国家和地区也都制定了有关手性药物的政策和法规。这大大推动了手性药物拆分的研究和生产应用。 目前提出注册申请和正在开发的手性药物中，单一对映体药物占绝大多数。 手性化合物：是指化学组成相同，而其立体结构互为对映体的 两种异构体化合物 1、 手性药物两种对映体的药效差异 一种有显著疗效，另一种有疗效弱或无效 一种有显著疗效，另一种有毒副作用 两种对映体的药效相