马铃薯多酚氧化酶基因克隆与反义表达载体构建.pdfVIP

西北植物学报 2003 23 10 1745—1749 . . - . . A cta B ot B orea l O ccid en t S in 文章编号2003 马铃薯多酚氧化酶基因克隆及 反义表达载体构建 1 1 2 2 王　清 王　蒂 黄俊生 郭安平 1 甘肃农业大学 农学院兰州 730070 2 中国热带农业科学院 生物技术国家重点实验室海口 57 110 1 摘　要 从甘农薯 1 号马铃薯试管苗叶片中提取总DN A 根据 Gen eb ank 报道的马铃薯多酚氧化酶基因P O T 32 序列设计合成了带有 、 特定酶切位点的2 对特异引物通过 获得 1 840 和 476 的扩增产 B am H S ac PCR bP bP 物 测序结果表明1 840 bp 的扩增产物与 Gen eb ank 中发表的序列一致476 bp 的扩增产物正是欲扩增的马铃薯 多酚氧化酶基因的同源片段 将 2 个扩增产物反向连接到表达载体 PC3 中通过双酶切鉴定后按直接导入法实现 反义基因表达载体质粒向农杆菌 EHA 105 的导入 并经 PCR 鉴定证明此质粒已整合到农杆菌 T i 上 关键词 马铃薯 基因克隆 反义基因表达载体构建 PPO 中图分类号 943. 2 532　　　文献标识码 Q S A C lon in g of pota to polyphen ol ox ida se gen e an d con struct in g of an t isen se PPO expre ss ion vector 1 1 2 2 W AN G Q in g W AN G D i HU AN G J un sh en g GU O A n p in g 1 730070 2 A gronom y Co llege Gan su A gr icu ltu ra lU n iver sity L anzhou Ch ina N at iona l L abo rato ry fo r A grob io techno logy Ch i 57 110 1 na T rop ic A gr icu ltu ra l Scien t ific Con st itu te H a ikou Ch ina . 1. A bstract