第十三章 作业-传感器.docVIP

酶传感器的工作原理 生物传感器的检测原理: 待测物质进入生物活性材料(如酶、蛋白质、DNA、抗体、抗原、生物膜等)，经分子识别，发生生物学反应，产生的信息继而被相应的物理或化学换能器转变成可定量和可处理的电、声、光等信号。再经二次仪表放大并输出，便可知道待测物浓度。传感器的结构一般由两部分组成，其一是生物分子识别元件(感受器)，是指将一种或数种相关生物活性材料固定在其表面(也称生物敏感膜)；其二是能把生物活性表达的信号转换为电、声、光等信号的物理或化学换能器，二者结合在一起，用现代微电子和自动化仪表技术进行生物信号的再加工，构成各种可以使用的生物传感器分析装置、仪器和系统。 酶传感器的基本原理: 酶电极由固定化酶和基础电极组成.固定化酶膜与基础电极紧密结合称为密接型;将固定化酶充填在反应器内,连同基础电极组成流动分析系统称为分离型, 密接型应用比较广泛. 酶电极的设计主要参考酶促反应过程产生或消耗的电极活性物质(electroactive substance),如果一个耗氧过程,就可以使用O2电极或H2O2电极作为基础器件;若酶反应为产酸过程,则可使用pH电极. 用电化学装置检测酶在催化反应中生成或消耗的物质（电极活性物质），将其变换成电信号输出 固定化酶传感器是由Pt阳极和Ag阴极组成的极谱记录式H2O2电极与固定化酶膜构成的。它是通过电化学装置测定由酶反应生成或消耗的离子，通过电化学方法测定电极活性物质的数量，以测定被测成分的浓度。 酶传感器是由酶敏感膜和电化学器件构成的。由于酶是水溶性的物质，不能直接用于传感器，必须将其与适当的载体结合形成不溶于水的固定化酶膜。由于酶是蛋白质组成的生物催化剂，能催化许多生物化学反应。生物细胞的复杂代谢就是由成千上万不同的酶控制的。酶的催化效率极高，而且具有高度专一性，即只能对特定生物量（底物）进行选择性催化，并且有化学放大作用，因此利用酶的特性可以制造出高灵敏度、选择性较好的传感器。(葡萄糖、乳酸、尿素、尿酸、肌酸、肌酐、谷氨酰胺、血清中总蛋白、血清中胆固醇、血清中甘油三脂、天门冬酰胺等)测定。 常见的实用化的一类酶传感器件是酶电极。将酶膜设置在转换电极附近，被测物质在酶膜上发生催化反应后，生成电极活性物质，如O。、H。O。、NH。等电极活性物质的产生或消耗由电极来检测。例如，葡萄糖透过葡萄糖氧化酶固定化膜时产生下列酶促反应：G01C6 H．：o。(葡萄糖)+O：GODc。H．。o。(葡萄糖核酸)+H。o。 (11-14)氧的消耗和过氧化氢的产生可由氧电极和过氧化氢电极来测量。根据酶电极的信号输出方式，分为电流型和电位型两类电极。电流型电极是从与催化反应有关物质的电极反应所得到的电流来确定浓度的，一般有氧电极、燃料电池型电极、H2 02电极等。电位型电极通过测量敏感膜电位来确定与催化反应有关的各种离子浓度。一般采用NH。电极、CO：电极、H：电极等。酶电极的特性除与基础电板特性有关外，还与酶的活性、底物浓度、酶膜厚度、pH值和温度有关。1．葡萄糖酶电极其敏感膜为葡萄糖氧化酶，它固定在聚乙烯酰胺凝胶上。转换电极为Clark氧电极，其Pt阴极上覆盖一层透氧聚四氟乙烯膜。当酶电极插入被测葡萄糖溶液中时，溶液中的葡萄糖因葡萄糖氧化酶作用而被氧化，此过程中将消耗氧气。此时在氧电极附近的氧气量由于酶促反应而减少，通过测量电流值的变化就可以确定葡萄糖浓度。葡萄糖传感器的核心是酶膜，提高酶膜的性能是提高酶电极性能的关键。 主要的酶膜有以下几种。 聚丙烯酸铵膜，这种膜对葡萄糖的扩散电阻大，且难以形成薄膜，故相应速度慢骨胶原膜，此膜扩散电阻小，可显著改善响应速度。将酶固定在细孔径的不同种类的多孑L性膜上，可抑制试液中高分子物质等杂质直接与酶接触，提高酶的活力。酶膜上覆盖多孔膜，这样葡萄糖在酶膜上易扩散，使传感器响应速度较快，同时多孔膜能减少试液对的污染，使酶膜长期稳定性改善。2．乳酸酶电极乳酸酶电极也是一种实用化的酶电极，其酶促反应为CH。CHOHCOO-（乳酸G根）+o：兰酸单氧化生CH。COO-(醋酸根)+CO：+H20(11-15)CH。CHOHCOO-(乳酸G根)+O：乳酸单氧化酶，CH。COCOO-（丙酮酸根）+ H2 02(1卜16)因此，通过测量氧的消耗、CO：或H20：生成量就可得出乳酸盐含量。乳酸酶电极将已预活化的免疫亲和膜与LOD(乳酸酶)直接结合，然后固定在铂阳极上。AgAgCl电极为参比电极，在0.6 V工作电压下测量电流变化，并以黄素腺嘌呤二核苷酸二钠盐为辅酶，将MgClz作为激活剂。乳酸盐的检测范围为2.5×10-7～2.5 X 10-4 mol／L，响应时间小于2分钟，常规测量中的变异系数为i26～3%。 3．光寻址电位酶传