基因组改组技术选育嗜果糖、耐SO2葡萄酒酵母.docVIP

LANZHOU UNIVERSITY OF TECHNOLOGY 毕业设计(论文) 题 目 基因组改组技术选育嗜果糖、耐SO2葡萄酒酵母 学生姓名 学 号 专业班级 指导教师 学 院 答辩日期 基因组改组技术选育嗜果糖、耐SO2葡萄酒酵母 摘要 　　以C-1、C-2、C-3、C-4作为出发菌株，用紫外线和化学诱，分别用含高浓度SO2和果糖培养基筛选，获得2株SO2耐性提高的菌株C-2-4和C-4-2和2株果糖利用率的菌株C-1-8和C-3-1。以这4株菌株作为正突变库，通过基因组改组，获得5株耐SO2性能和嗜果糖性能都较好的酵母菌株。其中第一轮改组后的菌株A-2对SO2的耐受性与C-4-2相比提高59.7%，A-7利用果糖特性与C-1-8相比提高了20%。第二轮改组后的菌株B-1的耐SO2特性提高了14%，利用果糖特性提高了34%。 　　关键词：葡萄酒酵母；基因组改组；SO2；嗜果糖；原生质体融合 Abstract By UV induced mutagenesis and chemical mutagenesis methods of wine yeast strain C-1, C-2, C-3 and C-4,and screening on nutrient medium containing high concentrations of SO2 and fructose, we obtained 2 SO2 tolerance improved strains C-2-4 and C-4-2 and two fructose utilization increasing strains C-1-8 and C-3-1. We made use of genome shuffing to the library of 4 generate improved strains in this work.We shuffed twice these improved strain by protoplast fusion and finally obtained 5 strains with higher SO2 tolerance and addicted to fructose. The SO2 tolerance of the first round of the reconstituted strain A-2 improved 59.7% compared with the C-4-2, A-7 features the use of fructose increased by 20% compared with C-1-8. The SO2 tolerance of the second round of Genome Shuffling strain B-1 has a 14% increase compared with the C-4-2, and the use of fructose characteristics increased by 34 % compared with C-1-8. 　　Key words:Wine yeast; Genome Shuffling; Resistance to SO2; Addicted to fructose; Protoplast fusion 摘要 1 Abstract 2 一、综述 5 一葡萄酒酵母 5 （二）葡萄酒酵母菌种的选育 5 1自然选育 5 2诱变育种 6 3杂交育种 6 4细胞融合育种 7 5基因工程育种 7 （三）基因组改组技术 7 1Genomeshuffling技术的具体方法 7 2GenomeshuffIing的优点 8 （）酵母菌对SO2的耐受性及研究现状 8 （五）酵母的嗜果糖特性及研究现状 8 （六）本课题的研究和研究 8 二、材料与方法 8 （一）材料 8 1菌株 8 8 （二实验方法 9 1出发菌的选择 9 2出发菌株对SO2耐受性实验 9 3果糖耐受性实验 9 4发酵液中果糖的测定（半胱氨酸—咔唑比色法 9 5.紫外线诱变 10 （1）诱变剂量的确定 10 （2） 10 6.化学诱变 10 （1）诱变剂量的确定 10 10 7.嗜果糖诱变株的筛选 10 8耐SO2诱变株的筛选 10 9第一轮融合 10 1）菌体培养 10 2）原生质体的制备 10 （3原生质体的形成率和再生率计算 11 4）原生质体灭活 11 （5原生质体融合及初筛 11 10第二轮融合 11 11选