实时荧光定量RT-PCR检测不同鸡种肉品质相关功能基因.PDF

实时荧光定量RT-PCR 检测不同鸡种肉品质相关功能基因 A-FABP 和 H-FABP 的表达 屠云洁，高玉时，王克华，陈宽维，窦套存，唐修君 中国农业科学院家禽研究所 （中国农业科学院家禽研究所, 扬州 225003 ） 摘要：本研究以如皋黄鸡和安卡红鸡为研究群体，选用A －FABP和H －FABP作为影响鸡肌内脂肪的候 选基因，利用实时荧光定量逆转录PCR(FQ-RT-PCR) ，对12周龄A －FABP和H －FABP基因mRNA进行定量分 析，结合IMF含量和屠宰性状测定，分析A －FABP和H －FABP基因表达水平对IMF含量等性状的影响。结果 表明：H-FABP基因mRNA表达量与肌内脂肪呈现显著的负相关，A －FABP基因表达对IMF影响不显著，但 与腹脂率呈显著正相关（P ＜0.05 ）。安卡红鸡H －FABP基因mRNA在IMF含量的表达量显著高于生长较慢 的如皋黄鸡（P ＜0.05 ）。安卡红鸡A －FABP基因mRNA在腹脂的表达量显著低于生长较慢的如皋黄鸡。H －FABP基因表达水平在不同性别间差异不显著，而A －FABP基因表达水平母鸡显著高于公鸡。 关键词：鸡，荧光定量逆转录PCR ；基因表达；肉品质 肌内脂肪与肌肉的风味品质和食用价值有很大的关系，是影响肉质的重要因素。因此进行肌内脂肪性 状的研究，是改善快大鸡种肉质和保持地方鸡种特殊肉质风味的重要举措。心脏脂肪酸结合蛋白(H-FABP) 和脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白（A-FABP ）是影响肌内脂肪（IMF ）含量的候选基因（Fisher ，2001 ；Hotamisligi ， 1996）。在纯种的杜洛克猪群中已经证实，A-FABP 基因位点的遗传变异与肌内脂肪含量显著相关(Gerbens 等，1998, 1999)。尤溪麻鸡、鹿苑鸡和隐性白羽鸡品种间基因的A-FABP 第三外显子（1805 位点）的SNP 影响氨基酸序列的变化：由脯氨酸变为丝氨酸； A-FABP 基因多态位点产生的不同基因型对鸡IMF 含量具 有显著的影响；（屠云洁等，2004 ；Tu Yun-Jie 等，2004 ；陈宽维等，2006 ）。 由于FABPs 基因上的遗传变化最终将影响他们基因表达水平的质或量的变化，所以在 mRNA 水平上研究 A-FABP 和H-FABP 基因对IMF 沉积的影响作用，具有十分重要的意义。 实时荧光定量PCR （real time fluorescent quantitativ PCR ，FQ -PCR ）技术实现了PCR 从定性到定量的 飞跃，与逆转录聚合酶链反应（reverse transcriptase PCR ，RT-PCR ）相结合使定量极微量的基因表达成为可 能，广泛用于基因表达研究、基因功能研究（张静敏等,2004; 李文海等,2005 ）等方面。 本研究利用实时荧光定量逆转录PCR 技术（FQ-RT-PCR ），分析不同品种、性别鸡A-FABP 和H-FABP 基因mRNA 表达在不同品种中的变化规律, 并结合屠宰试验，分析A-FABP 和H-FABP 基因mRNA 表达水 平对肌内脂肪含量(IMF)含量的影响，检测这两个基因在鸡群体中表达的差异，探索其对鸡肉的风味品质的 作用。这有利于我们进一步认识肌内脂肪含量(IMF) 的遗传机制，为鸡肉质性状的遗传改良提供新的途径。 1. 材料与方法 1.1 试验材料 选用如皋黄鸡和安卡红鸡作为试验群体。两种鸡均来自中国农业科学院家禽研究所育种中心。试验鸡 群采用网上平养方式，整个饲养周期采用肉鸡全价日粮饲养于同一试验场中。 1.2 屠宰性能测定及样品采集 在12 周龄屠宰取样，随机抽取皋黄鸡50 只鸡(公母各半)和安卡红鸡30 只(公母各半) 。屠宰过程中，立 即采集鸡心肌组织和腹脂，保存于液氮中，随后转存到-70℃冰箱用于候选基因的表达 RNA 的提取。采集 完整的单侧胸肌和腿肌，在进行各测定指标的称量后，分别去掉可见脂肪，绞碎后装袋，保存于-20℃用于 肌内脂肪的提取。 1.3 肌内脂肪的提取 屠宰后24h ，采用索氏浸提法测定胸肌及腿肌的肌内脂肪含量(IMF) 。最后根据公式：IMF%=(提前总重- 提后总重)/(提前总重