第5讲DNA和蛋白质技术1．提取原理DNA与杂质的溶解度不同，DNA.PPTVIP

* 典例探究·明考向 新课标 · 生物（广东专用） 第5讲　DNA和蛋白质技术 1．提取原理 DNA与杂质的溶解度不同，DNA与杂质对酶、高温、 洗涤剂的 不同。 2．实验设计 (1)材料的选取：选用DNA含量相对 的生物组织，如鸡血、菜花、洋葱等。 (2)破碎细胞(以鸡血为例)：鸡血细胞液，加 ，用 搅拌，用 过滤， 收集滤液。 (3)去除杂质：利用DNA在不同浓度的 中溶解度不同，通过控制 的浓度去除杂质。 (4)DNA析出：将处理后的溶液过滤，加入与滤液体积相等的、冷却的 (体积分数为95%)。 3．DNA的鉴定 将DNA溶解在2 mol/L的NaCl溶液中，加入4mL的 ，沸水中加热 5 min，溶液变成蓝色。 耐受性 较高 蒸馏水 玻璃棒 纱布 NaCl溶液 溶液 酒精溶液 二苯胺试剂 1．PCR原理 DNA的 。 2．PCR反应过程 (1)变性：当温度上升到 以上时，双链DNA解聚为 。 (2)复性：温度下降到 时，两种 通过碱基互补配对与两条单链DNA结合。 (3)延伸：温度上升到 时，溶液中的4种脱氧核苷酸(A，T，C，G)在 的作用下，根据碱基互补配对原则合成新DNA链。 热变性 90 ℃ 单链 50℃左右 引物 72℃ DNA聚合酶 1．凝胶色谱法是根据蛋白质相对分子质量的大小分离蛋白质(√) 2．用凝胶色谱法分离蛋白质时，相对分子质量小的蛋白质先分离出来(×) 【提示】　相对分子质量大的蛋白质先分离出来。 3．电泳法分离蛋白质是根据蛋白质的带电性质、大小及形状不同，在电场中迁移的速度不同而实现分离(√) 4．用透析法可以除去样品中分子量较大的杂质(×) 【提示】　除去的是分子量较小的杂质。 1.基本原理 (1)血细胞在蒸馏水中易吸水而导致细胞膜和核膜的破裂，据此可得含核DNA的溶液。 (2)DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，在0.14 mol/L的NaCl溶液中溶解度最低。 (3)DNA不溶于酒精溶液；不被蛋白酶所水解；可被二苯胺染成蓝色。 1.PCR原理 在一定的缓冲溶液中通过控制温度并提供模板和原料，使DNA复制在体外反复进行。 2．PCR反应过程 (1)变性：当温度上升到90 ℃以上时，双链DNA解聚为单链， 如下图： (2)复性：温度下降至50 ℃左右时，两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合，如下图： (3)延伸：当温度上升至72 ℃左右，溶液中的四种脱氧核苷酸在DNA聚合酶的作用下，根据碱基互补配对原则合成新的DNA链，如下图： 3．结果 (1)PCR一般要经历三十多次循环，每次循环都包括变性、复性、延伸三步。 (2)两个引物之间的固定长度的DNA序列呈指数扩增。 说明：DNA复制需要引物的原因：DNA聚合酶不能从头开始合成DNA，而只能从3′端延伸DNA链。 2.实验操作程序 (1)样品处理 ①红细胞的洗涤：除去杂蛋白，以利于后续步骤的分离纯化； ②血红蛋白的释放：使红细胞破裂，血红蛋白释放出来； ③分离血红蛋白溶液：经过离心使血红蛋白和其他杂质分离开来，便于下一步对血红蛋白的纯化。 (2)粗分离——透析：除去样品中相对分子质量较小的杂质。 (3)纯化：一般采用凝胶色谱法对血红蛋白进行分离和纯化。 (4)纯度鉴定：一般用SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳法来测定蛋白质的分子量，即对血红蛋白进行纯度鉴定。 说明：相对分子质量不同的蛋白质通过凝胶时，相对分子质量较小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，而相对分子质量较大的蛋白质只能在凝胶外部移动，移动速度快，因此蛋白质分子彼此分离。 考向　蛋白质的提取和分离 1．本考点近三年命题较少，仅有2011年广东高考T5,2009年广东高考T38，考查了蛋白质提取与分离的原理。 2．预计2013年高考可能会将蛋白质的提取和分离与其他物质的提取和分离进行综合考查。 (2012·太原模拟)试回答下列“蛋白质提取与分离实验”和“叶绿体中色素提取和分离实验”的有关问题： (1)为了提取和分离血红蛋白，首先对红细胞进行洗涤以去除杂质蛋白，洗涤时应使用生理盐水而不使用蒸馏水的原因是__________。 (2)若要去除血清蛋白中的小分子杂质，采用图1装置。透析液是__________，一段时间