植物细胞转基因技术.pptVIP

植物细胞转化的方法种类及特点;植物转基因技术的一般操作过程; 间接转化法： 农杆菌介导法 病毒介导法 ; 间接转化法是以生物体为媒介的植物转基因方法,有农杆菌介导法和病毒介导法。 ; 农杆菌介导法是以农杆菌为媒介对植物进行遗传转化的方法。; 它是通过根癌农杆菌的Ti质粒(Tumer inducing plasmid)和发根农杆菌的Ri质粒(Root inducing plasmid)上的一段T-DNA区在农杆菌侵染 植物形成肿瘤的过程中,T-DNA可以被转移到植物细 胞并插入到染色体基因中。 ; T-DNA能够进行高频率的转移,而且Ti质粒和 Ri质粒上可以插入到50kb的外源基因,因此Ti质粒和 Ri质粒就成为植物基因转化的理想载体系统。; T-DNA可以将其携带的外源基因整合到植物基 因组中，T -DNA 上较重要的是 T 区两端左右边 界各为 25bp 的重复序列。其中14bp 是中心,分 10bp 和4bp 两组,是完全保守的。这两个边界是 T -DNA 转移所必需的。其中尤以右边界最为重 要。;vir基因;叶盘;优点： 技术较成熟,转化效率高 操作简单，不需要特殊仪器，培养周期短 外源基因多以单拷贝或低拷贝插入受体细胞,稳 定性好，减少了共抑制等基因沉默现象。 可将较大片段DNA完整地转移到植物基因组中 等。 ; 缺点： 主要转化双子叶植物。 T-DNA可以在植物染色体的任何区域内插入,有可能导致有益基因的插入失活。 迄今所获得的近 200种转基因植物中80%以上是通过根癌农杆菌系统转化获得的。 ; 病毒介导法是以病毒为媒介对植物进行遗传转化 的载体系统。具体来说就是将外源基因插入到病 毒基因组中,通过病毒对植物细胞的感染而将外源 基因导入植物细胞的一种植物转基因方法。 ;利用植物病毒介导法对植物基因进行遗传转化效 率比较高,但它的安全性受到质疑,主要用于动物 的基因转移。 ; 直接转化法(又称DNA直接导入法),它指不依 赖于生物体将裸露的DNA直接转移到植物细胞和原 生质体中,导致细胞转化的技术,与间接转化法相比, 直接转化法不需构建载体,因此又叫无载体介导转化 法。它适用于对农杆菌侵染不敏感的植物,使用此法 的前提是需要建立良好的细胞或原生质体培养及再 生系统。; DNA直接导入法最大的优点是无需选择宿主, 可以导入生物细胞；缺点是嵌合基因整合进宿主染 色体的频率低。该方法可以分为化学物质诱导法、 电穿孔法、脂质体法、显微注射法、基因枪法、离 子束介导法和花粉管通道法。 ;基因枪法 电击法 花粉管通道法 化学物质诱导法 显微注射法 脂质体法 ; 基因枪法最早是由美国康 奈尔大学的Sanford最先提出 的。它通过高速飞行的金属颗 粒将包被其外的目的基因直接 导入到受体细胞内，最后整合 到植物基因组并得以表达从而 实现基因转化的方法。1992 年，世界首例转基因小鼠就是 通过该法获得的。;DNA;; 优点： 克服了受体材料的限制，不必制备原生质体。 实验操作简单易行，适合于大多数细胞或组织，具有相当广泛的应用范围，已经成为植物细胞转化最有效方法之一。 缺点： 进去的DNA片段整合效率极低，遗传稳定性差，拷贝数多，不易获得再生植株。 ; 至今为止,该法已成为除了农杆菌介导转化法 以外应用最广泛的基因转移技术。此法已在葡萄、 水稻等植物转基因中应用,并获得转基因植株。基因 枪法也可以有效地用于叶绿体的转化，还可以转移 RNA、DNA克隆等。; 是在高压电脉冲作用下在新鲜分离的原生质体的 质膜上形成瞬时可逆性开放小孔,为外源DNA提供通 道,借此导入DNA等遗传物质,达到转化的目的。由 于质膜具有可修复性,外加电压造成的膜穿孔可在一 定的时间内自动修复,从而使细胞恢复到正常的生理 状况。;植物细胞;优点： 操作简便，可以一次转化许多原生质体，转化效 率较高，特别适于瞬间表达。 缺点： 有原生质体培养的麻烦,电穿孔易造成原生质体损伤使再生率降低。 该法已在甘蔗、大麦小孢子、剪股颖等植物的基 因转化当中。;花粉管通道法是利用植物授粉后,所形成的天然花粉管通道,经珠心通道,将外源DNA携带入胚囊,从而达到转化目的的一种植物转基因方法。;优点： 适用范围广，不依赖组织培养人工再生植株； 可直接获得转基因种子，育种时间短，在鉴定 时可直接针对目的性状的表现型来进行,简单快 捷； 转化速度较快，变异性状稳定较快； 方法简单,不需要复杂昂贵的仪器设备。