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第 6卷 第 2期 生命科学研究 V01．6 No．2
2002年 6月 LifeScienceResearch June2m2
受强力霉素调节的自杀基因表达载体系统的构建
和在乳腺癌细胞株 (MCF．7)的表达
罗赛群，胡维新，易伟峰，曾赵军，陈 迁
(中南大学 湘雅医学院分子生物学研究中心，中国湖南 长沙 410078)
摘 要：自杀基因治疗是恶性肿瘤基因治疗中最常用的速径之一 以逆转录病毒载体——DRe1RE为基础进
行载体构建．首先使用PCR技术对单纯疱疹病毒胸苷激酶基因(HSVtk)进行扩增，将 HSVtk基 因插^到pRe—
vTRE，形成重组栽体pRevTREdHSV~，用磷酸钙共沉淀法，经过两轮转染，分别将 pRevTRE／HSVtk和 pRevT~-On
质粒导入乳腺癌细胞株 (MCF-7)经过潮霉素B(Hyg~mycinB)和G418筛选，建立了一株稳定的受四环素衍生
物——强力霉素(Doxyeycline，Box)调控、表达 HsvIk基因产物的人乳腺癌细胞株 MCFq／3tFJtk／Tet—On．}珏vLk基
因表迭产物可以将无毒性的药物前体Ganciclo,Ar(GCV)转变成一种有毒的代谢产物，从而杀死乳腺癌细胞株
(MCF-7j，达到基 因治疗的 目的
关键词：人乳腺癌细胞株；基因治疗；自杀基因；旁观者效应；基因表达调控 ；强力霉素
中图分类号： 84； 86 文献标识码：A 文章编号：1007．78472【002)02．0137-05
TheConstructionofSuicideGeneExpressionVectorControlledby
Tet．OnandtheTransfectionofHumanBreastCancerCellLine(MCF．7)
LUOSai—qun，HUWei—xin，YIWei—feng，ZENGZhao—ju．，CHENQian
(MolecularBiologyResearchCenter， 埒 SchoolofMedb-ine，CentralSouth￡ !呻 ．CMngsha410078，Huna~，China)
Abstract；SuicidegenetherapyisoneofthechoicesintheCalleA~rgenehterapymseamh．RevTet—Ongeneexpres—
sionsystem WaSusedtodeliverthesuicidegeneHSVtktohumanbreaatcancercellfineMCF—7·andhtetkgeneex—·
pressionwascontrolledbytetracyclinederivative，doxycycline(Dox)．HSVtkgeneWaSinsertedintotheplasmid
pRevTRE andhtemcoir~oiiLmltretrovlrM vectorpRevTRE／HSVtkWaSconstm~ed．SuicidegeneHSVtkwasex·
pressed inthepresenceofDox．TwotransfcetionsofpRevTRE／HSVtkandpRevTet·Onwereperformedf MCF一7
celllinebyusingmodifiedcalcium phosphateco—precipitationmehtodrespectively，followedbyHygromycinB nad
G418 Tet-OnMCF-7celllinestablyexpressingtet—regulatde tkgenewasestablished．ThiscelllineWas namedas
MCFItk／TRE／Tet·OnnadHSVtkgeneexpressi
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