急性白血病细胞EDNRB基因启动子区甲基化状态研究.pdfVIP

摘要 急性白血病细胞EDNRB基因启动子区甲基化 状态研究 摘要 背景与目的 脊椎动物唯一的DNA自然修饰方式是甲基化修饰，DNA甲基化修饰是表 观遗传学(Epigeneties)的重要组成部分，在基因结构的稳定、基因表达调控等 方面起重要作用，DNA甲基化状态的改变与肿瘤的发生发展密切相关。白血病 细胞中某些基因，主要是抑癌基因(如ER，p15，p16等)其启动子区CpG岛 发生异常甲基化，导致这些抑癌基因表达下调或封闭，影响细胞的正常功能， 最终导致疾病的发生。 EDNRB基因即内皮素受体B(EndouthelinB)基因，定位于1 Receptor 3q22， 长约24kb，是癌肿中一个经常出现基因缺失的区域，含7个外显子和6个内含 子，编码一个442个氨基酸的蛋白，是G蛋白偶联的跨膜受体蛋白，该基因所 编码的内皮素是一种血管活性肽，具有三种不同形式ETl，ET2，和ET3。此外， EDNRB参与内皮素激活NO合成酶的过程。有研究发现，该基因与正常生长发 育相关：一EDNRB基因作为一种肿瘤抑制基因，在多种肿瘤的发生发展中起重要 作用，在许多肿瘤组织中该基因表达下调，已被确认该基因在多种肿瘤中存在 等位基因杂合性丢失(LOH)和REP(复制错误)的现象。 研究发现：肝细胞癌、膀胱癌、鼻咽癌、前列腺癌、乳腺癌等癌肿组织中 存在EDNRB基因启动子区CpG岛的异常高甲基化，而相应良性病变组织及正 常组织中均无该基因相应区域的高甲基化，用去甲基化药物处理后可使该基因 表达恢复。台湾的Hsiao等报道了在初治白血病及多发性骨髓瘤细胞中p16基因 和EDNRB基因的高甲基化状态，本实验将进一步检测EDNRB基因在初治急性 白血病、完全缓解的急性白血病及复发难治性白血病中的甲基化状态，并分析 该基因与临床特征之间的关系，进而探讨EDNRB基因启动子区CPG岛甲基化 模式的改变与白血病发生发展的关系。 摘要 实验材料与方法 1．标本来源：所有病例组标本共39例，均取自2009年2月至9月间郑州大 学第一附属医院血液科门诊及住院的急性白血病(AL)患者，均经细胞形态学、 组织化学、免疫学、分子生物学和(或)细胞遗传学确诊的病例。男21例，女 18例，年龄16．70岁。 2．实验分组：2．1初诊未治疗急性白血病组17例(AML10例，ALL7例)； 2．2完全缓解组13例；2．3复发难治性急性白血病组9例；2．4正常对照组8例。 其中初诊未治疗组，完全缓解组及复发难治组均留取患者骨髓血2ml。正常对照 组留取正常人为造血干细胞移植患者配型的健康供者骨髓血2ml，均用EDTA管 ．20℃保存备用。 3．方法：采用甲基化特异性聚合酶链反应(MS．PCR)对正常对照组骨髓血， 以及初诊未治组、完全缓解组、复发难治组骨髓血单个核细胞EDNRB基因启动 子区CpG岛甲基化状态进行检测。 4．数据处理：运用SPSSl7．0软件对实验数据进行统计学处理，采用x2检验， 以P=O．05为检验标准。 睦董 =日术 1．EDNRB基因在正常对照组无一例出现甲基化。 2．EDNRB基因在初诊未治疗AL组、完全缓解AL组及复发难治性AL组中 统计学意义，p=0．003。进一步做两两比较，则初治组与完全缓解组，复发难治 组与完全缓解组相比，差异均有统计学意义，pO．05。初治组与复发难治组相比， 差异无统计学意义，pO．05。 3．EDNRB基因甲基化状态与患者的性别、年龄、白血病分型之间无显著相 关性，差异无统计学意义，p0．05。 结论 1．EDNRB基因异常高甲基化模式参与了AL的发生发展。 2．EDNRB基因异常甲基化可能与白血病初治、复发难治以及完全缓解的状 态有关，而与患者的性别、年龄、白血病分型之间无显著相关性。 3．MSP是一种检测EDNRB基因甲基化状态敏感的实验方法。 甲基化 关键词 急性白血病EDNRB基因 Abstract Pr